WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:     | 1 || 3 |

«ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И РАДИОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЛИНЕЙНЫХ И ЦИКЛИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДНЫХ ИЗОТИОМОЧЕВИНЫ – КОНКУРЕНТНЫХ ИНГИБИТОРОВ СИНТАЗ ОКСИДА АЗОТА ...»

-- [ Страница 2 ] --

Все соединения были хорошо растворимы в воде. Исключением являлось производное Т-1046, содержащее протяжнный N-заместитель (C14), которое растворяли в присутствии Tween 80 (1:10).

Токсикологическая характеристика изучаемых производных ИТМ Результаты исследований показали, что изучаемые N,S-замещнные ИТМ являются умеренно токсичными соединениями (табл. 2). Для мышей при в/б введении значения ЛД50 находились в пределах 380-945 мг/кг.

При этом существенной зависимости проявления токсичности в ряду исследуемых соединений от их химического строения не установлено. Наименее токсичным являлось производное Т-1046, что, вероятно, было обусловлено его низкой растворимостью.

–  –  –

Т-982 515 ± 13 Т-1004 564 ± 23 Т-1005 564 ± 17 Т-1006 761 ± 65 Т-1019 615 ± 40 Т-1020 812 ± 32 Т-1023 410 ± 11 Т-1031 732 ± 50 Т-1032 411 ± 40 Т-1046 945 ± 57 Т-1049 760 ± 61 Т-1058 414 ± 17 Т-1059 380 ± 32 Т-1064 655 ± 16 NOS-ингибирующая активность изучаемых производных ИТМ Исследование ингибирующей активности изучаемых производных ИТМ на изолированных изоформах NOS показало, что все соединения в той или иной мере проявляли свойства ингибиторов NOS (табл. 3). Как и ожидалось, наличие Nзамещающего радикала в структуре этих ИТМ, в целом, ослабляло их аффинность к NOS по сравнению с S-этил/изопропил-ИТМ, у которых IC50 находится в наномолярной области (Wolff D.J., Gauld D.S., Neulander M.J. et al. Inactivation of nitric oxide synthase by substituted aminoguanidines and aminoisothioureas // J. Pharmacol. Exp.

Ther. – 1997. – V.283, N.1. – P.265-273). Тем не менее, ряд соединений – Т-1004, ТТ-1023, Т-1032, Т-1049 и Т-1059 вполне эффективно подавляли активность eNOS и iNOS (IC50 – 1,8-10 мкМ/л), на уровне, сопоставимом с активностью таких ингибиторов NOS, как L-NAA, L-NNA, L-NAME (Lambert L.E., Whitten J.P., Baron B.M. et al. Nitric oxide synthsis in the CNS endothelium and macrophages differs in its sensitivity to inhibition by arginine analogues // Life Sci. – 1991. – Vol.48, N.1. – P.69-75;

Boer R., Ulrich W.R., Klein T. et al. The inhibitory potency and selectivity of arginine substrate site nitric-oxide synthase inhibitors is solely determined by their affinity toward the different isoenzymes // Mol. Pharmacol. – 2000. – Vol.58, N.5. – P.1026-1034.).

Вместе с тем, в этих исследованиях проявилась и «положительная» сторона влияния N-радикала. Если большая часть изучаемых ИТМ, подобно S-алкил-ИТМ, являлась неселективными ингибиторами NOS, то такие N-заместители, как изобутаноил, циклобутаноил и циклогексаноил, в большей степени ослабляли взаимодействие N,S-замещнных ИТМ с нейрональной NOS, в результате чего такие соединения в той или иной степени приобретали селективность к ингибированию эндотелиальной и индуцибельной изоформ. Так, производные Т-1020, Т-1032 и Тпроявляли умеренную селективность (в 3-5 раз) к eNOS и iNOS, а соединения Ти Т-1059 в данных исследованиях демонстрировали уже практически значимый уровень селективности – в 15-30 раз активнее подавляя eNOS и iNOS, чем nNOS.

Сопоставление IC50 и ЛД50 изучаемых производных ИТМ показало, что наиболее активные соединения оказывают значительное ингибирующее влияние уже при концентрациях, на 2-3 порядка ниже токсических, что позволяло ожидать у этих соединений высокой физиологической активности при низких нетоксических дозах.

В опытах на изолированных NOS характер ингибирующего действия исследованных N,S-замещнных ИТМ, как и у S-алкил-ИТМ, был в полной мере конкурентным и обратимым – влияние этих соединений на каталитическую активность всех изоформ полностью нивелировалось при 8-10-кратном избытке Lаргинина.

–  –  –

Чисто конкурентное ингибирование NOS изучаемыми производными ИТМ подтвердили и результаты исследований на культурах клеток меланомы В16 и клеток HeLa, различающихся спектром экспрессируемых NOS. В этих опытах было показано, что после 2-х часов инкубации клеток с различными концентрациями изучаемых ИТМ, вплоть до токсических, удаление этих веществ из культуральной среды сопровождалось быстрым и полным восстановлением продукции NO до уровня интактных клеток, не имевших контакта с этими соединениями (таблица 4).

–  –  –

Примечание. – статистически значимое различие с контролем по критерию Даннета (во всех группах n = 5) Вместе с тем, в обеих клеточных культурах после 2 часов инкубации с высокими дозами L-NMMA сохранялось достоверное снижение на 10-20% продукции NO после его удаления из среды, что согласуется с данными о смешанном влияния L-NMMA на NOS – конкурентным ингибированием и необратимой инактивацией (Alderton W.K., 2001; Lee K.S., 2012).

–  –  –

NO статистически значимо ниже уровня, характерного для интактных животных, не получавших эндотоксин. Данное сходство свидетельствует, что влияние изучаемых производных ИТМ in vivo на эндогенный синтез NO определяется, собственно, их ингибирующим действием на NOS.

Дальнейшие исследования показали, что эти соединения после в/б введения быстро всасываются и распределяются в биологических тканях, проникая, в том числе, через ГЭБ. Так, на рис. 1,а показано, что вещества Т-1023 и Т-1059 уже в течение первого часа после в/б инъекции в дозе 10 мг/кг достоверно снижают синтез NO как в печени, так и в головном мозге мышей F1 (CBAC57BL6j). В тканях мозга, куда ЛПС не проникал при в/б введении, изучаемые ИТМ статистически значимо подавляли спонтанную продукцию NO, а в печени ингибиторы блокировали как спонтанный, так и индуцированный синтез NO.

Рисунок 1 - Влияние in vivo производных Т-1023 и Т-1059 в дозе 10 мг/кг на продукцию NO (А) и содержание его стабильных метаболитов (Б) в биологических тканях и жидкостях. Обозначения: 1 и 2 – статистически значимое различие по критерию Данна, соответственно, с контролем и группой, получавшей только ЛПС.

Изучаемые N,S-замещнные ИТМ обратимо ингибируют NOS, но их активность in vivo сохраняется длительное время. Так, однократное введение Т-1023 и Т-1059 в дозе 10 мг/кг отражалось и на уровне стабильных метаболитов, аккумулирующих NO

- через сутки после их инъекции наблюдалось выраженное снижение уровня NO2NO3- в различных тканях (рис. 1,б), которое коррелировало с изменениями синтеза самого NO. Результаты прямых экспериментальных оценок продолжительности NOSингибирующей активности изучаемых соединений in vivo показали, что однократное введение их в дозах 10-20 мг/кг сопровождается достоверным снижением продукции NO в тканях в течение 3-4 часов (рис. 2).

Рисунок 2 – Дозовая и временная зависимость влияния Т-1023 на эндогенный синтез NO в печени подопытных животных.

В целом, полученные на этом этапе данные о токсичности и NOS-ингибирующей активности позволили рассматривать производные ИТМ Т-1004, Т-1020, Т-1023, ТТ-1049 и Т-1059 как перспективные соединения, детальное изучение физиологических и фармакологических свойств которых представляет значительный научный и практический интерес.

Исследования влияния изучаемых ИТМ на сердечно-сосудистую систему Результаты исследований влияния изучаемых ИТМ на гемодинамику интактных крыс Wistar показали, что подобно некоторым известным ингибиторам NOS (Narayanan K., Spack L., McMillan K. et al. S-alkyl-L-thiocitrullines. Potent stereoselective inhibitors of nitric oxide synthase with strong pressor activity in vivo // J.

Biol. Chem. – 1995. – Vol.270, N.19. - P.11103–11110; Wray G.M., 1998; Alderton W.K., 2005; Lange M., Enkhbaatar P., Nakano Y. et al. Role of nitric oxide in shock: the large animal perspective // Front Biosci. (Landmark Ed.). – 2009. – Vol.14. – P.1979-1989.), эти соединения оказывают выраженное вазопрессорное действие, приводящее к повышению периферического сопротивления сосудов.

Как показано на рис. 3, при введении соединения Т-1059 однократно, в/б, 10 мг/кг (1/25 ЛД16) у подопытных животных наблюдалось значительное и длительное повышение сосудистого тонуса – показатель УПСС оставался достоверно повышенным на 30-45% в течение 90 минут. При этом вначале отмечался умеренный гипертензивный эффект - показатели АД достоверно повышались на 15-20% в течение первых 10 минут. Рост АД у этих животных сопровождался рефлекторным замедлением сердечного ритма, и далее, на фоне брадикардии развивалась умеренная гипотония при повышенном УПСС. В дальнейшем все изменения самостоятельно регрессировали по мере нормализации сосудистого тонуса. Сходные, но менее длительные изменения в гемодинамике нормотензивных крыс вызывало в этой же дозе соединение Т-1023. В этом случае вазопрессорное действие ослабевало через 30минут после введения данного производного ИТМ, и к 60 минуте показатель УПСС уже соответствовал исходному.

Рисунок 3 – Влияние изучаемых производных ИТМ в дозе 10 мг/кг на гемодинамику интактных наркотизированных крыс Wistar. Обозначения: светлые символы – соединение Т-1023, тмные – соединение Т-1059.

В использованных дозах изучаемых ИТМ барорефлекторная реакция, в целом, носила умеренный характер, который, скорее всего, не требует фармакологической коррекции: снижение ЧСС и АДС не превышало 10-15% и при этом не отмечалось ослабления насосной функции сердца и системного кровотока - показатели УО и СИ сохранялись на исходном уровне.

Полученные результаты не только показали наличие выраженной вазопрессорной активности у изучаемых ИТМ, но и в определнной мере свидетельствуют об их относительной безопасности. Поскольку эти вещества являются обратимыми ингибиторами NOS, их краткосрочные эффекты, в данном случае - вазопрессорное действие и гипертензивный эффект, можно отменить введением L-аргинина или фармакологических доноров NO, например, нитроглицерина (Alderton W.K., 2001), а выраженность рефлекторных изменений, в данном случае - брадикардию и гипотонию, можно корректировать холинолитиками, например, п/к введением атропина (Лекарственные средства. Пособие для врачей. Справочник. 15-е изд. / под ред. М.Д. Машковского. - М.: Новая Волна, 2005. – 1164 с.).

Для исследования вазопрессорных свойств изучаемых ИТМ при гиповолемиях в работе использовали модель геморрагического шока у крыс, вызванного острой, массивной потерей крови - около 50% циркулирующей крови за 8-12 минут. В этом случае кровопотеря приводила к развитию тяжлого шока. Как показано на рис. 4, к окончанию кровопотери у животных наблюдалась умеренная брадикардия и глубокая гипотония - АДС составляло 30%, АДД – около 20% от исходного. В течение первого часа гипотония частично компенсировалась за счт повышения тонуса сосудов и ЧСС

– к 60-й минуте АДС составляло 55%, АДД – 44% от исходного. Но полной компенсации не происходило, и на фоне сохраняющейся гипотонии и гипоперфузии через 40-60 минут после кровопотери у значительной части «нелеченых» крыс развивались нарушения насосной функции сердца, что, по-видимому, становилось основной причиной их гибели. Из 11 контрольных животных 5 особей (45%) погибло к 120 минуте опыта.

Рисунок 4 – Влияние фенилэфрина (0,5 мг/кг в/б) (слева) и соединения Т-1059 (10 мг/кг в/б) (справа) на показатели АД и ЧСС наркотизированных крыс Wistar при остром тяжлом геморрагическом шоке. Обозначения: 1 – контрольные животные; 2 – подопытные животные (в группах по 9-11 особей).

Введение фенилэфрина (однократно, в/б, 0,5 мг/кг) в дозе, эквивалентной, с учтом межвидового пересчта, максимально рекомендуемой дозе для человека при п/к и в/м введении (Машковский М.Д., 2005), сопровождалось развитием у подопытных крыс в состоянии геморрагического шока умеренного гипертензивного эффекта – показатели АД через 2-5 минут повысились на 40-70% в сравнении с контролем. Однако вазопрессорное действие фенилэфрина было непродолжительным

– статистически значимый гипертензивный эффект наблюдался до 20 минуты после инъекции. Достаточно слабое и кратковременное ослабление гипотонии при воздействии фенилэфрина в этих опытах, по существу, не влияло на течение шока – из 10 животных этой группы в течение 2 часов наблюдения погибло 5 особей (50%).

Качественно иная картина течения тяжлого геморрагического шока наблюдалась при однократном в/б введении изучаемых производных ИТМ, обладающих высокой NOS-ингибирующей активностью (Т-1020, Т-1023, Т-1049 и Т-1059), в дозе 10 мг/кг (порядка 1/25-1/70 ЛД16). Вазопрессорное действие этих соединений сопровождалось развитием выраженного и длительного гипертензивного эффекта, превосходившего эффект фенилэфрина в 1,5-2 раза по степени подъма АД и в 5-7 раз по продолжительности. В ряду исследованных ИТМ наиболее выраженное гипертензивное действие оказывало соединение Т-1059, обладающее высокой селективностью к eNOS и iNOS. Как показано на рис. 4, однократное введение этой ИТМ в нетоксической дозе поддерживало у крыс, потерявших 50% циркулирующей крови, показатели АД на уровне физиологической нормы в течение всего срока наблюдения.

Необходимость применения вазопрессоров при геморрагическом шоке, протекающем, по крайней мере, на ранних стадиях, при повышенном тонусе сосудов, не очевидна, поскольку избыточная централизация кровотока может отягощать течение такого состояния. Тем не менее, в этих опытах значительное и длительное ослабление тяжлой гипотонии при воздействии изучаемых ИТМ сопровождалось достоверным снижением краткосрочной летальности – в группах, получавших ингибиторы NOS, в течение 120 минут (до окончания опыта) не погибло ни одно животное, что свидетельствует о целесообразности разработки на основе этих соединений лекарственных средств для оказания помощи при острых гипотонических расстройствах на догоспитальном этапе.

В пользу важности широкого применения таких вазопрессоров свидетельствуют результаты исследований на моделях вазодилятационных гипотоний. Как показано на рис. 5, при введении ЛПС (18 мг/кг в/в) у подопытных крыс уже через 10 минут развивался острый эндотоксемический шок. Однократное введение таким животным фенилэфрина (0,5 мг/кг в/б) было малоэффективным. Гипертензивный эффект адреномиметика был слабым и кратковременным – статистически значимое повышение АД отмечено только на 10 минуте после инъекции препарата.

Рисунок 5 – Влияние фенилэфрина (0,5 мг/кг в/б) (слева) и соединения Т-1059 (10 мг/кг в/б) (справа) на показатели АД и ЧСС наркотизированных крыс Wistar при остром эндотоксемическом шоке. Обозначения: 1 – контрольные животные; 2 – подопытные животные (в группах по 8-9 особей).

–  –  –

В то же время, при введении соединения Т-1059 (однократно, в/б, 10 мг/кг) у таких животных наблюдался выраженный и длительный гипертензивный эффект.

Вазопрессорное действие ингибитора NOS в этих опытах сопровождалось умеренной рефлекторной брадикардией, которая, скорее всего, ограничивала рост АД С. Тем не менее, в течение 90 минут наблюдения показатели АДС у этих животных находились на уровне 85-90%, а АДД – 95-100% физиологической нормы.

Длительный гипертензивный эффект Т-1059 в аналогичной дозе наблюдался и при гипотонии, вызванной ганглиоблокадой. Как показано на рис. 6, ингибитор NOS практически полностью устранял гипотензивное влияние азаметония – с 20 минуты после введения Т-1059 и до конца наблюдения показатели АДД составляли 90-95%, а АДС – 85-90% от исходного уровня до введения ганглиолитика.

Повышение тонуса сосудов при действии ингибиторов NOS развивается без участия клеточных рецепторных структур (Dudzinski D., 2007; Ramadoss J., 2013;

Tang L., Wang H., Ziolo M.T. Targeting NOS as a therapeutic approach for heart failure // Pharmacol. Ther. – 2014. – Vol.142, N.3. – P.306-315.), нарушение функции которых во многом определяет патогенез гипотоний, при которых имеющиеся вазопрессоры неэффективны. Данная особенность механизма действия позволяет ожидать у ингибиторов NOS потенциальной способности к вазопрессорному действию при резистентных гипотониях. Подтверждением такой способности явились результаты исследований на модели рефрактерной вазоплегии, вызванной длительной эндотоксемией.

Как показано на рис. 7, при двукратном в/б введении ЛПС в дозе 2 мг/кг с интервалом в 18 часов у подопытных животных развивалась выраженная вазодилятационная гипотония. При этом длительная эндотоксемия значительно подавляла у этих животных реактивность сосудов к действию вазопрессоров. При введении фенилэфрина (однократно, в/б, 0,5 мг/кг) не наблюдалось сколько-нибудь значимых изменений АД в течение всего срока наблюдения, что свидетельствовало о развитии у этих животных рефрактерной вазоплегии.

Рисунок 7 – Влияние фенилэфрина (0,5 мг/кг в/б) (слева) и соединения Т-1059 (10 мг/кг в/б) (справа) на показатели АД и ЧСС наркотизированных крыс Wistar при рефрактерной вазоплегии на фоне длительной эндотоксемии (в группах по 7-8 особей).

Но данное состояние не являлось препятствием для реализации вазопрессорного действия изучаемых ингибиторов NOS. Как показано, введение Т-1059 (однократно, в/б, 10 мг/кг) сопровождалось развитием гипертензивного эффекта сразу после инъекции препарата. Уже на 2 минуте гипертензивное действие Т-1059 полностью нивелировало гипотензивный эффект эндотоксемии. В то же время, прессорное действие Т-1059 на этой модели было непродолжительным - с 5-ой минуты тонус сосудов снижался и значимым гипертензивный эффект оставался только в течение 20 минут. Относительно низкая продолжительность вазопрессорного действия изучаемых ИТМ при данном способе введения, по-видимому, обусловлена высокой экспрессией iNOS и перманентным пополнением их пула на поздних стадиях эндотоксемии (Cauwels A., 2007; Pautz A., Art J., Hahn S. et al. Regulation of the expression of inducible nitric oxide synthase // Nitric Oxide. – 2010. – Vol.23, N.2. – P.75В этом случае длительный гипертензивный эффект, вероятно, можно достичь при в/м или п/к введении, либо при продолжительной инфузии таких соединений.

В целом, установленная в проведнных исследованиях способность изучаемых ИТМ в нетоксических дозах к выраженному и длительному вазопрессорному действию при различных гипотониях, в том числе, резистентных к действию имеющихся средств, и отсутствие у них побочных эффектов, характерных для адреномиметиков, свидетельствуют, что такие соединения могут стать основой для разработки новых эффективных вазопрессорных и противошоковых средств, способных создать новые возможности фармакотерапии гипотонических расстройств, особенно при оказании экстренной, неотложной помощи и лечении критических состояний. Проведение детальных доклинических исследований наиболее эффективных ИТМ, в первую очередь, соединения Т-1059, является вполне обоснованным и целесообразным.

Исследования противолучевой активности изучаемых ИТМ Способность некоторых S-монозамещнных ИТМ (в первую очередь - S-метил/ этил/аминоэтил-ИТМ) к противолучевому действию была показана ещ в 1960-80 годах (Жеребченко П.Г., Зильбер Ю.Д., Поспехова Г.П. и др Радиозащитный эффект солей S-алкилзамещнных производных изотиомочевины при их раздельном и комбинироваанном изучении // Радиобиология. – 1968. – Т.8, №.4. – С.582-587;

Голощапова Ж.А., Тужилкова Т.Н., Мизрах Л.И. Экспериментальное обоснование использования некоторых производных изотиурония в качестве радиозащитных соединений // Радиобиология. – 1981. - Т.21, №.5. - С.521-525.). Но позднее было установлено, что эти ИТМ проявляют высокую NOS-ингибирующую активность (Garvey E.P., 1994; Wolff D.J., 1997). Более того, было выявлено, что многие известные радиопротекторы подавляют эндогенный синтез NO (Garvey E.P., 1994), а некоторые ингибиторы NOS и химические перехватчики NO обладают радиозащитным действием (Liebmann J., DeLica A.M., Ciffin D. et al. In vivo radiation protection by nitric oxide modulation // Cancer Res. – 1994. – Vol.54, N.13. – P.3365-3368;

Гильяно Н.А., Бондарев Г.Н., Носкин Л.А. и др. NO-зависимый путь модификации клеточной чувствительности к действию - и нейтронного излучений // Радиац. биол.

Радиоэкол. - 2004. - Т. 44, № 1. - С. 62-67; Гильяно Н.Я., Бондарев Г.Н., Коневега Л.В.

и др. Модификация клеточной радиочувствительности ингибиторами NO-синтаз // Радиац. биол. Радиоэкол. - 2005. - Т.45, № 1. - С.63-67; Проскуряков С.Я., Коноплянников А.Г., Скворцов В.Г. и др Структура, активность и биологические эффекты субстрат-подобных ингибиторов NO-синтаз // Биохимия. – 2005. – Т.70, №.1.

– С. 14-32; Коноплянников А.Г., Проскуряков С.Я., Коноплянникова О.А. и др Влияние некоторых ингибиторов NOS дигидротиазин-тиазолинового ряда на пострадиационное восстановление эндогенных КОЕ-С-8 у мышей // Радиац. биол.

Радиоэкол. - 2007. – Т.47, № 1. – С.5-9; Sharmaa D., Sandura S.K., Rashmia R. et al.

Differential activation of NF-B and nitric oxide in lymphocytes regulates in vitro and in vivo radiosensitivity // Mutat. Res. - 2010. - Vol.703, N.2. - P.149-157.).

Вместе с тем, эти данные позволяли лишь предполагать о возможных механизмах повышения радиорезистентности при воздействии на обмен NO и роль NOSингибирующей активности в развитии противолучевого эффекта оставалась не вполне ясной. Кроме того, не был в полной мере исследован и общий вопрос о целесообразности применения ингибиторов NOS в качестве радиозащитных и радиомодифицирующих средств.

Для оценки роли ингибирования NOS при реализации радиозащитного действия производных ИТМ нами было проведено изучение NOS-ингибирующей и противолучевой активности S-[2-алкил(арил)сульфонил]-производных S-этил(винил)ИТМ. Исследовано влияние этих производных ИТМ в дозах 1/3-1/2 ЛД50 на выживаемость аутбредных мышей при воздействии -излучения в дозе 10 Гр и активность синтеза NO в печени мышей F1 (CBAC57BL6j).

Сопоставление полученных данных, отражающих NOS-ингибирующую и противолучевую активность, показало наличие достоверной корреляции в ряду исследованных S-замещнных ИТМ: производные ИТМ, обладающие in vivo высокой способностью к подавлению синтеза NO, проявляли и большую противолучевую активность (Рис. 8).

–  –  –

Эта взаимосвязь свидетельствовала, что в развитии противолучевого действия Sалкил-ИТМ принципиальную роль играет подавление этими соединениями биогенного синтеза NO, и позволяла ожидать радиозащитное действие и у изучаемых N,S-замещнных ИТМ. Результаты предварительных исследований показали, что однократное в/б введение изучаемых N,S-замещнных ИТМ в дозах 1/4-1/2 ЛД16 за 15-20 минут до облучения достоверно повышало выживаемость подопытных животных и колониеобразующих гемопоэтических клеток при воздействии излучения (Рис. 9).

Рисунок 9 – Влияние изучаемых ИТМ на число селезночных эндоколоний у самцов мышей F1 (CBAC57BL6j) на 9 сутки после облучения в дозе 6 Гр. Во всех опытах 1 – контроль; 2 – цистамин 225 мг/кг. Опыт №1: 3 – Т-1004 120 мг/кг; 4 – Т-1006 120 мг/кг; 5 – Т-1023 120 мг/кг; 6 – Т-1032 150 мг/кг. Опыт №2: 3 – Т-1019 140 мг/кг; 4 – Т-1020 135 мг/кг; 5 – Т-1049 220 мг/кг; 6 – Т-1058 100 мг/кг. Опыт №3: 3 – Т-1023 130 мг/кг; 4 – Т-1059 120 мг/кг; 5 – Т-1064 220 мг/кг. Символом * отмечено статистически значимое различие с контролем.

В ряду исследованных N,S-замещнных ИТМ также отмечалась связь между NOS-ингибирующей и противолучевой активностью, аналогичная зависимости, выявленной для S-замещнных ИТМ. Слабые ингибиторы NOS (Т-1019, Т-1058, Тпроявляли умеренное, порой недостоверное радиозащитное действие. И, наоборот, активные ингибиторы NOS (соединения Т-1004, Т-1006, Т-1020, Т-1023, ТТ-1049 и Т-1059) обеспечивали противолучевую защиту, не уступая, а иногда и превосходя в эффективности действие цистамина и дифетура, которые применялись в дозах, близких к максимально переносимым (1/2 ЛД50).

Наблюдаемая связь между NOS-ингибирующей и противолучевой активностью изучаемых производных ИТМ, и наличие у них выраженных вазопрессорных свойств позволяли предположить, что основным механизмом противолучевого действия этих соединений является индукция тканевой гипоксии. Для проверки этого предположения было проведено исследование влияния изучаемых ИТМ в высоких, радиозащитных дозах (1/6-1/5 ЛД16) на гемодинамику интактных животных.

Как показано на рис. 10, при таких дозах изучаемые ИТМ вызывали изменения в гемодинамике, сходные с теми, которые наблюдались при применении этих соединений в низких дозах (см. рис. 3). Повышение УПСС в этом случае было более выраженным и продолжительным, и, как и при малых дозах, начальный гипертензивный эффект в дальнейшем на фоне брадикардии сменялся гипотонией при повышенном УПСС. Существенным отличием являлось то, что при данных дозах ИТМ вазопрессорное действие вызывало не только замедление сердечного ритма, но и сопровождалось ослаблением насосной функции сердца (УО снижался на 15-25%), и в результате отмечалось значительное и длительное ослабление системного кровотока: при воздействии Т-1059 СИ снижен на 30-35% в течение всего срока наблюдения; при воздействии Т-1023 - на 40-45% в течение 90 минут.

Рисунок 10 – Влияние изучаемых производных ИТМ на гемодинамику интактных наркотизированных крыс Wistar. Обозначения: светлые символы – соединение Т-1023 в дозе 60 мг/кг, тмные – соединение Т-1059 в дозе 40 мг/кг.

Следовательно, полученные данные согласуются с предположением о гипоксическом механизме противолучевого действия N,S-замещнных ИТМ. Причм, обращает на себя внимание сходство изменений в гемодинамике, которые индуцируют в радиозащитных дозах изучаемые ИТМ и серотонин- и адренергические радиопротекторы (Радиационная фармакология. / П.П. Саксонов, В.С. Шашков, П.В.

Сергеев. - М.: Медицина, 1976. – 256 с.; Противолучевые лекарственные средства (учебная монография) / М.В. Васин // М.: Изд-во Российской медицинской академии последипломного образования, 2010. – 180 с.), что позволяет рассматривать ингибиторы NOS, и, в частности, изучаемые ИТМ, как один из видов вазоактивных гипоксических радиопротекторов.

Для оценки перспективности применения изучаемых N,S-замещнных ИТМ в качестве радиозащитных средств было проведено детальное исследование противолучевой активности соединения Т-1023, которое в предварительных опытах оказывало наиболее выраженное и стабильное радиозащитное действие.

Исследование выживаемости клоногенных гемопоэтических клеток мышей F1 (CBAC57BL6j) при воздействии -излучения в дозе 5 Гр в зависимости от дозы соединения Т-1023 показало, что в отличие от аминотиоловых радиопротекторов, эффективно действующих только в субтоксических дозах (Васин М.В., 2010;

Рождественский Л.М., 2013), достоверное противолучевое действие Т-1023 наблюдалось уже при дозе 1/8 ЛД16 (40 мг/кг), достигало максимума в области 1/4 ЛД16 (75 мг/кг), а при более высоких дозах Т-1023 защитный эффект оставался неизменным (Рис. 11).

–  –  –

Аналогичная зависимость наблюдалась и по 30-суточной выживаемости мышей F1 (CBAC57BL6j) при облучении в дозе 10 Гр. В этом случае также достоверное противолучевое действие Т-1023 наблюдалось уже при дозе 1/8 ЛД16 (40 мг/кг), и радиозащитный эффект достигал максимума в области 1/4 ЛД16 (75-85 мг/кг). Эти данные позволили рассматривать дозу Т-1023 40 мг/кг как минимальную, а 75 мг/кг как оптимальную радиозащитную дозу, и оценить терапевтическую широту Т-1023.

Терапевтический индекс, рассчитанный как отношение минимальной радиозащитной дозы к ЛД10 (Хабриев Р.У., 2005), составил 5,5, а индекс радиозащитной широты, рассчитанный как ЕД50/ЛД50, составил 6,0 (4,18,8). Полученные показатели непротиворечивы и в 2-3 раза превышают соответствующие показатели серосодержащих радиопротекторов для данного вида животных.

Рисунок 12 – Влияние Т-1023 в дозе 75 мг/кг на выживаемость клоногенных клеток мышей F1 (CBAC57BL6j) при воздействии -облучения (тест селезночных экзоколоний). А, Б – данные двух экспериментов. 1 – контрольные, 2 – подопытные животные. Кривыми показаны соответствующие log-линейные регрессии.

В качестве показателя противолучевой эффективности использован ФИД, который оценивали для оптимальной радиозащитной дозы Т-1023 (75 мг/кг). В опытах по 30-суточной выживаемости мышей F1 (CBAC57BL6j) показатели ЛД50 излучения составили: для контрольных животных - 7,13 (6,627,64) Гр; для подопытных – 10,22 (9,6110,93) Гр. Величина ФИД по отношению этих ЛД 50, составила 1,44 (1,261,65). Несколько большие величины ФИД для этой дозы Т-1023 получены в двух опытах по выживаемости гемопоэтических клоногенных клеток (рис. 12). По данным первого опыта ФИД составил 1,81 (1,292,38), по данным второго - 1,56 (1,211,94).

Полученные в этих исследованиях показатели терапевтической широты и противолучевой эффективности Т-1023 по действующим критериям отбора противолучевых средств (Хабриев Р.У., 2005; Владимиров В.Г., 1989) позволяют рассматривать это соединение в качестве перспективного объекта для создания нового радиопротектора экстренного действия.

Сложность процессов развития лучевого поражения и различие механизмов действия ряда радиопротекторов создают возможность для их комбинированного применения. Несмотря на то, что противолучевая активность некоторых ингибиторов NOS была показана более 20 лет назад, их совместное применение с другими радиопротекторами остатся неисследованным. В этой связи было проведено сравнительное изучение влияния Т-1023 в сочетании с цистамином, серотонином, мексамином и индралином на выживаемость эндогенных клоногенных клеток костного мозга мышей F1 (CBAC57BL6j) при воздействии -излучения в дозе 6 Гр.

Результаты исследований показали значительное фармакодинамическое взаимодействие данного ингибитора NOS с противолучевыми средствами различных классов, характер которого, судя по всему, определялся вазоактивными свойствами радиопротекторов (Рис. 13).

Рисунок 13 – Влияние Т-1023 в сочетании с некоторыми известными радиопротекторами на число селезночных эндоколоний у мышей F1 (CBAC57BL6j) на 9 сутки после облучения в дозе 6 Гр. Символом * отмечены статистически значимые различия с группами, получавшими изучаемые соединения раздельно.

Сочетанное применение Т-1023 с цистамином, который в радиозащитных дозах вызывает резкое падение тонуса сосудов, сопровождалось достоверным снижением противолучевой эффективности. Но сочетанное применение Т-1023 с серотонин- и адренергическими радиопротекторами, обладающими вазопрессорным действием, сопровождалось выраженным увеличением радиозащитного эффекта. Причм, в этих опытах соединение Т-1023 статистически значимо повышало эффективность этих радиопротекторов даже в случае его применения в малых дозах, не проявляющих самостоятельного противолучевого действия. Полученные данные свидетельствуют, что ингибиторы NOS, и в частности, соединение Т-1023, могут являться ценными дополнительными компонентами, способными создать новые возможности в разработке более эффективных и безопасных противолучевых средств.

Исследования радиомодифицирующих свойств изучаемых ИТМ на моделях лучевой терапии опухолей Во многих исследованиях показано, что, в связи с несовершенством сосудистой сети новообразований, в тканях солидных опухолей имеются гипоксичные области, в которых содержание кислорода значительно ниже, чем в нормальных окружающих тканях (Микрофизиология опухолей / С.П. Осинский, П. Ваумпель. - Киев: Наукова думка, 2009 – 256 с.). Это различие в оксигенации может определять как резистентность опухолей к лучевому воздействию, так и риски развития осложнений радиотерапии. Индукция гипоксии фармакологическими средствами может в значительной мере селективно защищать нормальные ткани при лучевом воздействии (Prasanna P.G., 2012; Fahl W.E. Effect of topical vasoconstrictor exposure upon tumorocidal radiotherapy // Int. J. Cencer. – 2014. – Vol.135, N.4. – P.981-989; Nieder C., Andratschke N.H., Grosu A.L. Normal tissue studies in radiation oncology: A systematic review of highly cited articles and citation patterns // Oncol. Lett. – 2014. – Vol.8, N.3. – P.972-976.). В этой связи, способность изучаемых ИТМ создавать условия для развития гипоксии и оказывать эффективное противолучевое действие явилась основанием для изучения их радиомодифицирующих свойств на моделях лучевой терапии опухолей.

Исследования проведены на самцах крыс Wistar на моделях лучевой терапии саркомы М-1 при локальном воздействии на опухоль -излучения в дозах 32 и 36 Гр.

Животных-опухоленосителей брали в опыт на 11 сутки после перевивки саркомы.

Крысам подопытных групп перед облучением вводили Т-1023 (однократно, в/б, 75 мг/кг).

Результаты исследований показали, что однократное введение Т-1023 животнымопухоленосителям не оказывало влияния на рост необлучнной саркомы (табл. 6).

Независимо от применения Т-1023, рост опухоли имел экспоненциальный характер и на поздних сроках у многих животных этих групп в опухолевых узлах наблюдались некротические изменения.

–  –  –

1,4±0,3 1,3±0,2 1,3±0,3 1,1±0,5 3 1,3±0,5 1,2±0,3 2,0±0,4 1,1±0,6 1,0±0,4 5 2,2±0,3 1,3±0,3 1,0±0,7 0,9±0,3 1 2,4±0,6 2,3±0,6 0,9±0,5 0,6±0,4 7 1,1±0,3 0,7±0,2 1 0,7±0,4 1 0,3±0,3 1 0,6±0,4 1 3,1±0,9 3,2±0,8 0,4±0,2 1 2 0,6±0,4 1 0,2±0,3 1 2 0,3±0,3 1 2 4,4±1,5 13 4,2±1,3 0,3±0,1 1 2 0,4±0,3 1 2 0,2±0,2 1 2 0,3±0,3 1 2 5,6±2,2 17 5,8±2,1 0,4±0,2 1 2 0,5±0,5 1 0,3±0,3 1 2 0,4±0,5 1 10,6±3,9 10,0±3,1 Примечания. * данные нормированы на начальный (11 сутки роста) средний объм в группах; 1 – статистически значимое различие с контрольной группой; 2 – в группах, получавших облучение, статистически значимое различие с начальным значением (при t=0).

Несмотря на то, что Т-1023 было введено подопытным животным в оптимальной радиозащитной дозе, в этих исследованиях ингибитор NOS также не оказал влияния и на радиочувствительность саркомы. Как показано в табл. 6, на всех сроках не наблюдалось различий объмов опухолевых узлов между группами, получавшими облучение в равных дозах. Независимо от применения Т-1023, -излучение оказывало эффективное терапевтическое действие, сопровождавшееся значительным (в 3-5 раз) регрессом и длительной задержкой роста саркомы – по меньшей мере, на 17 суток. Во всех группах к 10-13 суткам после облучения у части животных наблюдался полный регресс узла (у 40% при дозе 32 Гр, и у 50-60% при дозе 36 Гр), но на поздних сроках отмечался рецидивный рост сохранившихся опухолей.

–  –  –

Если лучевые эффекты в отношении саркомы соединение Т-1023 в этих опытах не модифицировало, то его влияние на тяжесть лучевых реакций кожи было отчтливым. В группах, получавших облучение в дозе 32 Гр, начальная динамика развития кожных лучевых реакций не различались: проявления манифестировали на 3-5 сутки и до 7-х суток оставались в пределах 1-ой степени реакции – отмечалась умеренная эритема и сухой, иногда, распространнный эпидермит (табл. 7). Но к 10суткам у большей части крыс, не получавших соединение Т-1023, тяжесть лучевых повреждений быстро нарастала - развивался влажный, чаще сливной эпидермит, нередко сопровождавшийся изъязвлениями и мелкими кровотечениями (рис. 14), что свидетельствовало о полном поражении и отторжении эпидермиса и частичном поражении дермы. Воспалительные процессы в этой группе протекали длительно и у значительной части животных, имевших высокую степень лучевой реакции, до конца наблюдения регенерация повреждений оставалась незавершнной.

–  –  –

У крыс, которым перед облучением в дозе 32 Гр вводили соединение Т-1023, к 10-13 суткам отягощение лучевой реакции наблюдалось у небольшой части особей, и, как правило, было ограничено усилением эритемы и развитием умеренного островкового влажного эпидермита (табл. 7, рис. 15), что свидетельствовало о значительной сохранности эпидермиса. В этот период отличия тяжести лучевых повреждений кожи между группами, облучнными в дозе 32 Гр, принимало выраженный характер и по степени лучевой реакции в классификации RTOG-95 наблюдалось статистически значимое различие. В дальнейшем у крыс, получивших Т-1023, проявления лучевой реакции быстро регрессировали и к 25-м суткам эксперимента у 75% этих животных полностью отсутствовали какие-либо изменения кожи и е придатков.

–  –  –

При воздействии -излучением в дозе 36 Гр соединение Т-1023 также оказывало статистически значимое влияние на развитие острой лучевой реакции кожи (табл. 8).

У животных, не получавших Т-1023, к 10-13 суткам в большинстве случаев на фоне выраженного отка кожи развивался распространнный экссудативный дерматит, нередко приобретавший язвенно-некротический характер, сопровождавшийся изъязвлениями, кровоизлияниями и формированием глубоких дефектов (рис.

16), что свидетельствовало о значительном поражении глубоких слов дермы и подлежащих тканей. В дальнейшем, по мере ослабления воспаления, такие дефекты восстанавливались за счт краевой эпителизации, а в некоторых случаях - за счт кожных дериватов с формированием рубцовой ткани. К 25-м суткам эксперимента у большинства животных этой группы регенерация лучевых повреждений кожи оставалась незавершнной.

–  –  –

У большинства животных, получавших Т-1023 перед облучением в дозе 36 Гр, к 10-13 суткам выраженный сухой эпидермит приобретал характер островкового экссудативного (рис. 17). Однако сливная форма развилась только у четверти этих животных и язвенно-некротических явлений при этом не наблюдалось (табл. 8). В дальнейшем, по мере ослабления воспаления, у этих крыс развивалась активная регенерация - к 25 суткам у подавляющего большинства животных этой группы сохранялись минимальные проявления лучевой реакции – сухое шелушение кожи и, в разной степени, эпиляция шрстного покрова на внутренней поверхности облучнной конечности. Только у одной особи регенерация после сливного экссудативного дерматита оставалась незавершнной.

Таким образом, при обеих дозах -излучения соединение Т-1023 статистически значимо ограничивало степень острых лучевых реакции кожи подопытных животных.

При этом заметного влияния Т-1023 на развитие воспалительных и регенераторных процессов в этих опытах не наблюдалось – течение близких по объму и клинической тяжести лучевых повреждений у опытных и контрольных животных было сходным.

Это свидетельствует, что соединение Т-1023 ослабляло, именно, лучевую альтерацию глубоких слов кожи и подлежащих тканей – вызывало снижение радиочувствительности нормальных тканей в поле облучения. В то же время, в этих опытах ингибитор NOS не модифицировал чувствительность саркомы к лучевому воздействию и не снижал противоопухолевую эффективность радиотерапии.

Полученные в этих исследованиях результаты свидетельствуют, что гипоксический механизм противолучевого действия ингибиторов NOS позволяет им оказывать селективную защиту немалигнизированных тканей при лучевой терапии солидных новообразований и в этой связи изучаемые производные ИТМ, и, в частности, соединение Т-1023, можно рассматривать как перспективную основу для разработки фармакологических средств профилактики осложнений радиотерапии.

Исследования противоопухолевой и антиметастатической активности изучаемых ИТМ Участие NO в сосудистой системе касается и таких долгосрочных процессов, как ангиогенез. Авторы исследований опухолевого ангиогенеза среди множества модуляторов особую роль отводят оксиду азота (Isenberg J.S., 2009; Ziche M., Morbidelli L. Molecular regulation of tumour angiogenesis by nitric oxide // Eur. Cytokine Netw. - 2009. – Vol.20, N.4. - P.164-170; Burke A.J., Sullivan F.J., Giles F.J. et al. The yin and yang of the nitric oxide in cancer progression // Carcinogenesis. – 2013. – Vol.34, N.3.

– P.503-512; Cheng H., 2014). Действие большинства ангиогенных факторов вызывает повышение экспрессии и каталитической активности eNOS в клетках эндотелия, что, в свою очередь, инициирует каскад процессов, ведущих к длительному снижению тонуса сосудов и повышению их проницаемости, миграции и пролиферации эндотелиальных клеток, и, в конечном итоге, к развитию новой сосудистой сети. В этой связи неспецифическое антиваскулогенное влияние на опухоль может оказывать подавление синтеза NO химическими ингибиторами NOS.

Эти представления, а также данные о способности изучаемых N,S-замещнных ИТМ к эффективному ингибированию активности NOS явились основанием для изучения противоопухолевой и антиметастатической активности этих соединений.

Ежедневное в/б введение самцам мышей F1 (CBAC57BL6j) соединений Т-1004, Т1023 и Т-1032 в дозе 60 мг/кг (1/6-1/5 ЛД16) с 1 по 21-22 сутки после перевивки карциномы лгких Льюис (КЛЛ) не вызывало каких-либо токсических и летальных эффектов. В то же время, все эти ИТМ оказывали сходное влияние на развитие КЛЛ, сопровождавшееся статистически значимым антиметастатическим и противоопухолевым эффектом. Как показано на рис.

18, при такой схеме введения противоопухолевый эффект ингибиторов NOS реализовался преимущественно на раннем этапе развития карциномы и проявлялся начальной задержкой роста опухоли:

на 1,5-2 суток – при воздействии Т-1004 и Т-1032; и на 3 суток – при воздействии ТВ результате этой задержки объм опухоли у животных подопытных групп оставался достоверно ниже, чем в контроле в течение всего срока наблюдения и индекс ТРО стабильно сохранялся на высоком уровне: 30-50% - для соединений Ти Т-1032; 45-70% - для соединения Т-1023. При этом ингибиторы NOS также подавляли и метастазирование карциномы – на 21-22 сутки роста опухоли число лгочных метастазов у подопытных животных было на 35-50% меньше, чем в контроле.

Противоопухолевая активность изучаемых ИТМ наблюдалась не только на ранних стадиях опухолевого процесса. Как показано, введение Т-1023 с 7 суток роста КЛЛ, когда опухолевые узлы уже сформировались у всех животных, также сопровождалось развитием задержки роста опухоли примерно на 2 суток, и через 10 дней объм опухолей у животных опытной группы был достоверно ниже, чем в контроле (ИР снижался до 47-50%). Кроме того, воздействие Т-1023 на развившуюся карциному в данном опыте сопровождалось выраженным антиметастатическим эффектом – на 21 сутки число лгочных метастазов у подопытных животных было в 5 раз ниже, чем в контроле. Причм, в этом случае соединение Т-1023 не только эффективно ингибировало процессы метастазирования, но статистически значимо подавляло рост метастазов – число крупных лгочных метастазов снизилось почти в 3 раза.

Рисунок 18 – Влияние на рост и метастазирование карциномы лгких Льюис соединения Т-1023 при ежедневном введении в дозе 60 мг/кг с 1 по 21 сутки (вверху) и с 7 по 21 сутки после перевивки (внизу). Обозначения: светлые символы – контроль; тмные – подопытные животные; символом * отмечены статистически значимые различия с контролем.

Предположение об антиангиогенном механизме противоопухолевого действия изучаемых ИТМ было подтверждено при сравнительном изучении влияния на морфологию тканей КЛЛ соединения Т-1023 и VEGF-ингибитора бевацизумаба (авастин). Результаты этих исследований показали, что Т-1023, подобно бевацизумабу, вызывает при субхроническом введении выраженные нарушения перитуморальной васкуляризации опухоли (рис. 19), которые сопровождаются достоверным снижением пролиферативной активности клеток карциномы и повышением их апоптотической и некротической гибели.

Известно, что применяемые в онкологической практике ингибиторы VEGF и мультикиназные ингибиторы повышают эффективность радио- и химиотерапии (Fang P., Hu J.H., Cheng Z.G., et al. Efficacy and safety of bevacizumab for the treatment of advanced hepatocellular carcinoma: a systematic review of phase II trials // PLoS One. – 2012. – Vol.7, N.12. - doi: 10.1371/journal.pone.0049717; Lein S., Lowman H.B.

Therapeutic anti-VEFG antibodies // Handb. Exp. Pharmacol. - 2008. - N.181. - P.131-150;

Schmidt B., 2012; Abdel-Rahman O., 2014). Изучаемые производные ИТМ также демонстрировали такую способность. Так, сравнительное изучение противоопухолевого действия циклофосфана и соединения Т-1023 при их раздельном и сочетанном применении показало, что эти средства обладают однонаправленной противоопухолевой активностью, но разными механизмами действия на карциному лгких Льюис (рис. 20).

Рисунок 19 – Сосудистая сеть перитуморальных зон опухолевых узлов карциномы лгких Льюис на 15 сутки роста (250). Иммуноокрашивание антителами к CD31.

Слева – опухоль контрольного животного, справа – опухоль животного, получавшего соединение Т-1023.

Рисунок 20 – Влияние на морфофункциональные показатели тканей карциномы лгких Льюис циклофосфана и соединения Т-1023 при их раздельном и сочетанном применении. Символом * отмечены статистически значимые различия с группами, получавшими циклофосфан и Т-1023 раздельно.

Соединение Т-1023, нарушая васкулогенез, снижало пролиферативную активность клеток карциномы, способствовало их апоптотической гибели и выраженно стимулировало формирование зон некроза в экспериментальной опухоли.

Циклофосфан вызывал альтеративно-деструктивные изменения паренхимы и стромы опухоли, сопровождавшиеся снижением пролиферации клеток карциномы и значительным усилением их апоптотической гибели. При сочетанном применении Ти циклофосфана наблюдалось отчтливое усиление выраженности патоморфологических нарушений в тканях КЛЛ, степени индукции апоптотической и некротической гибели клеток карциномы, и резкое снижение репопуляционной способности неопластических клеток (рис. 21).

–  –  –

Полученные данные свидетельствуют, что ингибиторы NOS, в том числе, и изучаемые производные ИТМ, могут являться перспективной основой для разработки лекарственных средств комплексной терапии онкологических заболеваний.

ВЫВОДЫ

1. Выявлены особенности химического строения N,S-алкил/ацил-замещнных изотиомочевин, определяющие их NOS-ингибирующие свойства. Наиболее активными конкурентными, обратимыми ингибиторами NO-синтаз являются соединения, в которых S-замещающий радикал представлен низшим алкилом.

Селективность таких производных к изоформам NOS определяется N-замещающим радикалом.

2. Полученные в результате направленного синтеза N-ацил-S-алкил-замещнные изотиомочевины под шифрами Т-1004, Т-1020, Т-1023, Т-1032, Т-1049 и Т-1059 проявляют селективность к ингибированию eNOS и iNOS, и в нетоксических дозах in vivo вызывают выраженное подавление эндогенного синтеза NO в биологических жидкостях и тканях организма, что свидетельствует о целесообразности детального изучения их фармакологических свойств.

3. Сосудосуживающее действие N,S-замещнных ИТМ: Т-1020, Т-1023, Т-1049 и Тоднократно, в/б) в нетоксических дозах (~1/25 ЛД16) реализуется на различных моделях гипотонических состояний, в том числе, резистентных к действию существующих вазопрессорных лекарственных средств, и отличается большой длительностью и отсутствием нежелательных эффектов, характерных для адреномиметиков.

4. При нормотензивном состоянии вазопрессорное действие исследованных производных ИТМ сопровождается незначительным гипертензивным эффектом вследствие развития барорефлекторной реакции, ограничивающей подъм АД.

Назначение таких соединений в эффективных «гипертензивных» дозах (~1/25 ЛД16) сопровождается умеренной рефлекторной реакцией, не требующей фармакологической коррекции.

5. Противолучевое действие алкил-замещнных изотиомочевин реализуется путм индукции гипоксии. Испытанные соединения: Т-1004, Т-1023, Т-1032, Т-1049 обеспечивают эффективную радиационную защиту в меньших дозах, по сравнению с известными серосодержащими радиопротекторами, действующими в субтоксических дозах, и повышают противолучевую эффективность серотонин- и адренергических радиопротекторов.

6. Противолучевое действие исследованных производных ИТМ (Т-1004, Т-1023) способно обеспечивать селективную защиту немалигнизированных тканей при лучевой терапии солидных опухолей, без ослабления противоопухолевой эффективности радиационного воздействия.

7. Исследованные производные ИТМ при субхроническом введении оказывают выраженное противоопухолевое и антиметастатическое действие, подавляя опухолевый ангиогенез и стимулируя апоптотическую и некротическую гибель опухолевых клеток, и повышают эффективность радио- и химиотерапии новообразований.

8. Полученные данные свидетельствуют о перспективности разработки на основе наиболее активных соединений (Т-1004, Т-1023, Т-1059) лекарственных средств принципиально нового механизма действия, способных расширить возможности фармакотерапии при лечении ряда распространнных заболеваний, при оказании экстренной, неотложной помощи и терапии критических состояний.

РЕКОМЕНДАЦИИ

Выявленные в данном исследовании особенности молекулярной структуры N,Sзамещнных ИТМ, определяющие их способность к ингибированию NOS, и установленная зависимость селективности изученных соединений к изоформам NOS от характера N-замещающего ацильного радикала создают основу для рационального поиска и дизайна селективных, конкурентных тиоамидиновых ингибиторов NOS в ряду производных ИТМ, тиазола, тиазолина, тиазина.



Pages:     | 1 || 3 |

Похожие работы:

«НАУМОВ Юрий Анатольевич АНТРОПОГЕННАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ ПРИБРЕЖНО-ШЕЛЬФОВЫХ ГЕОСИСТЕМ ОКРАИННЫХ МОРЕЙ ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА РОССИИ 25.00.36 – Геоэкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора географических наук Томск 2008 Работа выполнена на кафедре экологии и природопользования Владивостокского государственного университета экономики и сервиса Научный консультант: доктор географических наук, профессор Кочуров Борис Иванович Официальные оппоненты: доктор...»

«Абдуллоева Елена Юрьевна БИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ БОЛЕЗНИ МАРЕКА ИЗ ВИРУСА 1 И 3 СЕРОТИПОВ 03.02.02 «Вирусология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир – 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» ФГБУ «ВНИИЗЖ» доктор ветеринарных наук Камалова Научный руководитель: Наталья Евгеньевна Еремец Владимир Иванович – доктор Официальные оппоненты:...»

«Бирюкова Лидия Игоревна Диагностика, клинико-морфологическая характеристика и лечение накожного папилломатоза и дерматоза внутренней поверхности ушной раковины у лошадей 06.02.04 – ветеринарная хирургия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Москва 2015 Работа выполнена в ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии МВА имени К.И. Скрябина» Научный руководитель: Сотникова Лариса Федоровна, доктор...»

«Дандал Али Шебли ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир-2015 Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ) Россельхознадзора и в ФГБАОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Научный руководитель: Макаров Владимир...»

«ФЕДИН АНДРЕЙ ВИКТОРОВИЧ КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ РИНОСИНУСИТОВ 14.03.09. – аллергология и иммунология 14.01.03. – болезни уха, горла и носа АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Пенза – 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Пензенский институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения...»

«САГИТОВА МИНЗИЛЯ ГАБДУЛХАЕВНА ГИГИЕНИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ПОЛИСАХАРИДА «ГРАМО» В ПТИЦЕВОДСТВЕ 06.02.05 ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2015 Работа выполнена в условиях кафедры зоогигиены федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Казанская государственная академия...»

«ДОБРЕНЬКОВ ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЦЕНОТИЧЕСКИХ ОТНОШЕНИЙ БАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ ПОЛОСТИ РТА И МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИНЦИПОВ БИОКОРРЕКЦИИ 03.02.03 – Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения...»

«ГАЛИНИЧЕВ АНДРЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ ЦИКАДОВЫЕ (HEMIPTERA, CICADINA) УРАЛА: СОСТАВ ФАУНЫ, ЭКОЛОГИЯ И ХОРОЛОГИЯ 03.02.08 – экология (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Нижний Новгород Работа выполнена на кафедре зоологии федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего образования «Нижегородский государственный университет им. Н. И. Лобачевского» Научный руководитель: доктор биологических...»

«Солнцев Роман Викторович Лесоводственная эффективность осушительной мелиорации в заболоченных сосняках и на их вырубках в условиях Среднего Урала (на примере стационара «Северный»). 06.03.02. – Лесоведение, лесоводство, лесоустройство и лесная таксация. АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Екатеринбург – 2014 Работа выполнена на кафедре лесной таксации и лесоустройства ФГБОУ ВПО «Уральский государственный лесотехнический...»

«Курбонов Косим Муродович СОВРЕМЕННЫЕ ЭПИЗООТОЛОГО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И НАДЗОР ЗА БРУЦЕЛЛЕЗОМ В РЕСПУБЛИКЕ ТАДЖИКИСТАН 14.02.02 – эпидемиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском институте профилактической медицины Министерства здравоохранения и социальной защиты населения Республики Таджикистан Научные руководители: Доктор медицинских наук, профессор...»

«ДРОБОТ Елена Игоревна РЕАКТИВНОСТЬ КЛЕТОК ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННОЙ РАЗНЫМИ ПЛАЗМИДНЫМИ ВАРИАНТАМИ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2014 Работа выполнена в лаборатории клеточной биологии и гистопатологии ФГБУ «Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова» СО РАМН. Научный...»

«ВАРЕНЦОВА Алиса Алексеевна АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ ГЕНОВ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 03.02.02 «Вирусология» Aвтореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир – 2014 Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии)...»

«Абросимова Светлана Борисовна Совершенствование методов селекции картофеля на устойчивость к золотистой цистообразующей нематоде (Globodera rostochiensis (Woll.) Специальность: 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Москва – 2014 Диссертационная работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт картофельного...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 эпидемиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва – 2014 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки « Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора Научный консультант: Заслуженный деятель науки РФ, профессор, доктор медицинских наук Ющенко...»

«Худоногова Елена Геннадьевна БИОЛОГИЯ, ЭКОЛОГИЯ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ПОЛЕЗНЫХ РАСТЕНИЙ ПРЕДБАЙКАЛЬЯ: АНАЛИЗ, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ И ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Специальность 03.02.01 – ботаника (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Оренбург 2015 Работа выполнена на кафедре ботаники, плодоводства и ландшафтной архитектуры в ФГБОУ ВО «Иркутский государственный аграрный университет имени А.А. Ежевского» Научный консультант:...»

«Гривенная Елена Николаевна МОНИТОРИНГ КАЧЕСТВА ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ В СИСТЕМЕ МВД РОССИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РЕЙТИНГОВЫХ ТЕХНОЛОГИЙ 13.00.08 – Теория и методика профессионального образования Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора педагогических наук Краснодар – 2015 Работа выполнена в ФГКОУ ВПО «Краснодарский университет Министерства внутренних дел Российской Федерации». Научный доктор педагогических наук, профессор консультант: Ганченко...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени кандидата биологических наук Брянск 2014 Работа выполнена на кафедре экологии и рационального природопользования ФГБОУ ВПО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского» Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Анищенко...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Саратов – 2015 Работа выполнена в Балашовском институте (филиале) федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Саратовский государственный университет имени Н.Г....»

«Герасимов Максим Александрович Аэрозольная санация воздушной среды кролиководческих помещений при профилактике респираторных заболеваний кроликов 06.02.05ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарносанитарная экспертиза АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена ФГБОУ ВПО «Московская государственная сельскохозяйственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» на кафедре...»

«Потапова Анна Викторовна ВЛИЯНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ ТРОФИЧЕСКИХ СУБСТРАТОВ ТЯЖЁЛЫМИ МЕТАЛЛАМИ И ХЛОРОРГАНИЧЕСКИМИ СОЕДИНЕНИЯМИ НА КАЧЕСТВО ЛОСИНОГО МОЛОКА 03.02.08 – Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Костромской государственный университет им. Н. А. Некрасова» Научный руководитель: доктор биологических наук, Баранов Александр Васильевич Официальные оппоненты: Марзанов Нурбий...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.