WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 |

«ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И РАДИОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЛИНЕЙНЫХ И ЦИКЛИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДНЫХ ИЗОТИОМОЧЕВИНЫ – КОНКУРЕНТНЫХ ИНГИБИТОРОВ СИНТАЗ ОКСИДА АЗОТА ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Филимонова Марина Владимировна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И РАДИОБИОЛОГИЧЕСКИЕ

ЭФФЕКТЫ ЛИНЕЙНЫХ И ЦИКЛИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДНЫХ

ИЗОТИОМОЧЕВИНЫ – КОНКУРЕНТНЫХ ИНГИБИТОРОВ СИНТАЗ

ОКСИДА АЗОТА

14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология

03.01.01 – радиобиология

Автореферат

диссертации на соискание учной степени доктора биологических наук

Обнинск - 2015

Работа выполнена в Медицинском радиологическом научном центре им. А.Ф. Цыба – филиале Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный медицинский исследовательский центр им. П.А. Герцена» Министерства здравоохранения Российской Федерации (с 09.02.2015 организация переименована в Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыба – филиал Федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский радиологический центр» Министерства здравоохранения Российской Федерации (МРНЦ им. А.Ф.Цыбафилиал ФГБУ «НМТРЦ» Минздрава России))

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Арзамасцев Евгений Вениаминович доктор медицинских наук Жаворонков Леонид Петрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, руководитель Центра доклинических испытаний, заведующий лабораторией фармакологии ФГБУН «Институт физиологически активных веществ» РАН Кинзирский Александр Сергеевич доктор медицинских наук, профессор, ректор Института ДПО «Экстремальная медицина»

ФГБУ «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины имени А.М. Никифорова» МЧС России Гребенюк Александр Николаевич доктор биологических наук, заведующий лабораторией радиационной биофизики ФГБУ «ГНЦ РФ – Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна» ФМБА России Осипов Андриян Николаевич

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И.Пирогова» Минздрава России

Защита диссертации состоится «_____» ______________ 2015 года в _____ на заседании диссертационного совета Д 001.024.01 на базе ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В.Закусова» по адресу: 125315, г. Москва, ул. Балтийская, д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ученой части ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» по адресу: 125315, г. Москва, ул. Балтийская, д.8 и на сайте www.academpharm.ru.

Автореферат разослан "____ " __________ 2015 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Вальдман Елена Артуровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Наличие оксида азота (NO) в биологических тканях было описано ещ в первой половине XIX века. Но только спустя 150 лет, когда было установлено, что эндогенный NO является фактором релаксации сосудов (Furchgott, R.F., Zawadzki J.V. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine // Nature. – 1980. – Vol.288, N.5789. – P.373–376;

Palmer R.M, Ferrige A.G., Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor // Nature. - 1987. - Vol.327, N.6122. P.524-526.), присутствует в активированных макрофагах (Stuehr D.J., Kwon N.S., Gross S.S. et al. Synthesis of nitrogen oxides from L-arginine by macrophage cytosol: requirement for inducible and constitutive components // Biochem. Biophys. Res. Common. - 1989. Vol.161, N.2. - P.420-426.) и тканях мозга (Garthwaite J. New insight into the functioning of nitric oxide-receptive guanylyl cyclase: physiological and pharmacological implications // Mol. Cell Biochem. – 2010. – Vol.334, N.1-2. – P.221-23.), оксид азота привлк большое внимание специалистов в различных областях биологии и медицины.

Объм научных данных о биологической роли NO, накопленный к настоящему времени, столь велик, что затруднительно осознать даже общую картину, создаваемую ими. Оксид азота участвует в регуляции тонуса сосудов и адгезии клеток крови, сократимости миокарда и скелетных мышц, тонуса бронхов и моторики ЖКТ, модулирует процессы ангиогенеза и регенерации, является медиатором многих видов чувствительности и участвует в процессах высшей нервной деятельности, регулирует митохондриальную активность и редокс-гомеостаз, является эффектором иммунных реакций (Taylor C.

T., Moncada S. Nitric oxide, cytochrome C oxidase, and the cellular response to hypoxia // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. – 2010. – Vol.30, N.4. – P.643-647; Forstermann U., Sessa W.C. Nitric oxide synthases: regulation and function // Eur. Heart J. – 2012. – Vol.33, N.7. – P.829-837; Vincent S.R. Nitric oxide neurons and neurotransmission // Prog. Neurobiol. – 2010. – Vol.90, N.2. – P.246-255; Niu X., Watts

V.L., Cingolani O.H. et al. Cardioprotective effect of beta-3 adrenergic receptor agonism:

role of neuronal nitric oxide synthase // J. Am. Coll. Cardiol. – 2012. – Vol.59, N.22. – P.1979-1987; Tang L., Wang H., Ziolo M.T. Targeting NOS as a therapeutic approach for heart failure // Pharmacol. Ther. – 2014. – Vol.142, N.3. – P.306-315.). Эти знания расширили представления о механизмах многих физиологических и патологических процессов, и создали основу для развития новых подходов к лечению ряда заболеваний и патологических состояний путм модификации эндогенного синтеза оксида азота.

Однако, если фармакологические средства, стимулирующие продукцию оксида азота – химические доноры NO, вошли в клиническую практику задолго до открытия биологической роли оксида азота (в частности, нитроглицерин применяется при лечении стенокардии уже около 150 лет (Brunton T.L. On the use of nitrite of amyl in angina pectoris // Lancet. – 1867. – N.2. – P.97–98.), то становление фармакологических средств, подавляющих продукцию NO - ингибиторов синтаз оксида азота (NOS), происходит только в последние десятилетия.

Данные многих исследований свидетельствуют о том, что ингибиторы NOS могут иметь практическое значение в лечении патологических состояний, протекающих с избыточной продукцией NO (сепсис, эндотоксемии, воспалительные и дегенеративные заболевания) и способны проявлять широкий спектр фармакологических свойств – оказывать вазопрессорное, кардио- и нейрозащитное, противовоспалительное действие (Hernandez G., Bruhn A., Ince C. Microcirculation in sepsis: new persprctives // Curr. Vasc. Pharmacol. – 2013. – Vol.11, N.2. – P.161-169;

Moncada S., Bolanos J.P. Nitric oxide, cell bioenergetics and neurodegeneration // J.

Neurochem. – 2006. – Vol.97, N.6. – P.1676-1689; Calcerrada P., Peluffo G., Radi R. Nitric oxide-derived oxidants with a focus on peroxynitrite: molecular targets, cellular responses and therapeutic implications // Curr. Pharm. Des. – 2011. – Vol.17, N.35. – P.3905-3932;

Rochette L., Lorin J., Zeller M. et al. Nitric oxide synthase inhibition and oxidative stress in cardiovascular diseases: possible therapeutic targets? // Pharmacol. Ther. – 2013. – Vol.140, N.3. – P.239-257; Omar S.A., Webb A.G. Nitrite reduction and cardiovascular protection // J. Mol. Cell Cardiol. – 2014. – Vol.73. – P.57-69; Leiper J., Nandi M. The therapeutic potential of targeting endogenous inhibitors of nitric oxide synthesis // Nat. Rev. Drug Discov. – 2011. – Vol.10, N.4. – P.277-291.). Вместе с тем, несмотря на большие усилия, разработка NOS-ингибирующих фармакологических средств пока не получила удовлетворительного воплощения - в настоящее время известно более 600 различных соединений, способных подавлять активность NOS, но на стадию клинических испытаний смогли выйти лишь единицы из них.

Препятствия для клинического применения ингибиторов NOS связаны не только с их токсическими и фармакокинетическими свойствами. В значительной мере они обусловлены сложностью самой организации эндогенного синтеза NO. В тканях организма оксид азота продуцируется семейством изоформ NOS, которые существенно отличаются участием в различных процессах (Dudzinski D.M., Michel T.

Life history of eNOS: Partners and pathway // Cardiovasc. Res. – 2007. – Vol.75, N.2. – P.247-260; Villanueva C., Giulivi C. Subcellular and cellular locations of nitric-oxide synthase isoforms as determinants of health and disease // Free Radic. Biol. Med. – 2010. – Vol.49, N.3. – P.307-316; Ramadoss J., Pastore M.B., Magness R.R. Endothelial caveolar subcellular domain regulation of endothelial nitric oxide synthase // Clim. Exp. Pharmacol.

Physiol. – 2013. – V.40, N.11. – P.753-764.). И в этой связи практический интерес представляют, в первую очередь, соединения, избирательно ингибирующие изоформы NOS. Однако значимый уровень селективности проявляет не более 3-5% известных ингибиторов NOS.

Важным фактором также является механизм ингибирующего действия.

Большинство известных ингибиторов NOS (или их метаболиты) частично или в полной мере необратимо инактивируют эти ферменты (Wolff D.J., Lubeskie A.

Inactivation of nitric oxide synthase isofoms by diaminoguanidine and NG-amino-Larginine // Arch. Biochem. Biophys. – 1996. – Vol.325, N.2. – P.227-234; Li H., Poulos T.L. Structure-function studies on nitric oxide synthases // J. Inorg. Biochem. – 2005. – Vol.99, N.1. – P.293-305; Lee K.S., Lee D.K., Jeoung D. et al. Differential effects of substrate-analogue inhibitors on nitric oxide synthase dimerization // Biochem. Biophys.

Res. Commun. – 2012. – Vol.418, N.1. – P.49-55.). Между тем, необратимое подавление активности NOS является далеко не всегда целесообразным и безопасным. По этой причине многие известные ингибиторы NOS, в том числе и селективные, остаются удобными инструментами исследований, но возможность их клинического применения представляется сомнительной (Alderton W.K., Cooper C.E., Knowles R.G.

Nitric oxide synthases: structure, function and inhibition // Biochem. J. – 2001. – Vol.357, Pt.3. – P.593-615; Zhu Y., Nikolic D., Van Breemen R.B. et al. Mechanism of inactivation of inducible nitric oxide synthase by amidines. Irreversible enzyme inactivation without inactivator modification // J. Am. Chem. Soc. – 2005. – Vol.127, N.3. – P.858-868;

Viteceek J., Lojek A., Valacchi G. et al. Arginin-based inhibitors of nitric oxide synthase:

therapeutic potential and challenges // Mediators Inflamm. – 2012. – Vol.2012. – Art.ID:

318087.).

При таких обстоятельствах перспективными могут оказаться селективные ингибиторы NOS с обратимым, субстрат-конкурентным действием. В связи с поиском химических соединений, обладающих такими свойствами, привлекают внимание линейные и циклические производные изотиомочевины (ИТМ), имеющие в своей молекулярной структуре тиоамидиновый фрагмент R1-NH-C(SR2)=NR3, изостеричный гуанидиновой группе L-аргинина. Тиоамидиновый фрагмент, выполняя роль псевдосубстрата, может позволить таким соединениям конкурировать за активный центр NOS, что подтверждает наличие в ряду S-алкил-ИТМ чрезвычайно активных, неселективных ингибиторов NOS, являющихся в полной мере обратимыми, конкурентными ингибиторами (Garvey E.P., Oplinger J.A., Tanoury G.J. et al. Potent and selective inhibition of human nitric oxide synthases. Inhibition by non-amino acid isothioureas // J. Biol. Chem. – 1994. – Vol.269, N.43. – P.26669-26676; Wolff D.J., Gauld D.S., Neulander M.J. et al Inactivation of nitric oxide synthase by substituted aminoguanidines and aminoisothioureas // J. Pharmacol. Exp. Ther. – 1997. – V.283, N.1. – P.265-273.).

Для поиска селективных ингибиторов NOS в этой области может представлять интерес мало изученный класс N,S-замещнных ИТМ - результаты единичных работ в этой области свидетельствуют, что строение N-замещающего радикала может оказывать существенное влияние на селективность соединений к изоформам NOS (Shearer B.G., Lee S., Oplinger J.A. et al. Substituted N-phenylisothioureas: potent inhibitors of human nitric oxide synthase with neuronal isoform selectivity // J. Med. Chem.

– 1997. – Vol.40, N.12. – P.1901-1905; Проскуряков С.Я., Кучеренко Н.Г., Тришкина А.И. и др. NO-ингибирующая и вазотропная активность некоторых соединений, содержащих тиоамидиновую группу // Бюлл. экспер. биол. мед. – 2002. - Т.134, №.10.

- С.393-396.).

Наряду с проблемами поиска приемлемых ингибиторов NOS остаются отрытыми и многие вопросы, связанные с их биологической активностью. Фармакологическим эффектом ингибиторов NOS, механизм которого на сегодня наиболее изучен, является вазопрессорное действие. Ожидается, что ингибиторы NOS могут иметь преимущества в сравнении с имеющимися вазопрессорами - большую длительность действия, отсутствие побочных эффектов, характерных для адреномиметиков, способность повышать тонус сосудов при резистентных вазоплегиях, что может позволить им занять важное место при лечении критических состояний и при оказании неотложной, экстренной помощи (Hernandez G., Bruhn A., Ince C.

Microcirculation in sepsis: new persprctives // Curr. Vasc. Pharmacol. – 2013. – Vol.11, N.2. – P.161-169; Cauwels A. Nitric oxide in shock // Kidney Int. – 2007. – Vol.72, N.5. – P.557-565; Andrades M.E., Morina A., Spasic S. et al. Bench-to-bedside review: sepsis from the redox point of view // Crit. Care. – 2011. – Vol.15, N.5. – P.230-241.). Однако гемодинамические эффекты ингибиторов NOS на моделях различных состояний и в клинических наблюдениях нередко носят противоречивый характер (Gamboa A., Shibao C., Diedrich A. et al. Contribution of endothelial nitric oxide to blood pressure in humans // Hypertension. – 2007. – Vol.49, N.1. – P.170-177; Wecht, J.M., Weir J.P., Goldstein D.S., et al. Direct and reflexive effects of nitric oxide synthase inhibition on blood pressure // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. – 2008. – Vol.294, N.1. – P.H190-H197;

Juffermans N.P., Vervloet M.G, Daemen-Gubbels C.R. A dose-finding study of methylene blue to inhibit nitric oxide actions in the hemodynamics of human septic shock // Nitric Oxide. – 2010. – Vol.22, N.4. – P.275-280.). Это свидетельствует о необходимости детального изучения вазоактивных свойств ингибиторов NOS, поскольку неоднозначная трактовка и недооценка эффектов препятствуют внедрению таких средств в клиническую практику (Bailev A., Pope T.W., Moore S.A. et al The tragedy of TRIUMPH for nitric oxide synthesis inhibition in cardiogenic shock: where do we go from here? // Am. J. Cardiovasc. Drugs. – 2007. – Vol.7, N.5. – P.337-345; Viteceek J., Lojek A., Valacchi G. et al. J. Arginin-based inhibitors of nitric oxide synthase: therapeutic potential and challenges // Mediators Inflamm. – 2012. – Vol.2012. – Art.ID: 318087.).

Менее изученной остатся противолучевая активность ингибиторов NOS, хотя их способность к радиозащитному действию была показана более 20 лет назад (Liebmann J., DeLica A.M., Ciffin D. et al. In vivo radiation protection by nitric oxide modulation // Cancer Res. – 1994. – Vol.54, N.13. – P.3365-3368.). Рост клинической потребности в эффективных противолучевых средствах в настоящее время обусловлен неуклонным расширением применения методов радиационной медицины в лечении онкологических заболеваний (Цыб А.Ф., Будагов Р.С., Замулаева И.А. и др Радиация и патология: учебное пособие / под общ. ред. А.Ф. Цыба. - М.: Высшая школа, 2005. – 341 с.; Иванов В.К., Цыб А.Ф., Метлер Ф.А. Радиационные риски медицинского облучения // Радиация и риск. - 2011. - Т.20, №.2. - С.17-29; Prasanna P.G., Stone H.B., Wong R.S. et al. Normal tissue protection for improving radiotherapy: Where are the Gaps?

// Transl. Cancer Res. – 2012. – Vol.1, N.1. – P.35-48; Maier P., Wenz F., Herskind C.

Radioprotection of normal tissue cells // Strahlenther. Oncol. – 2014. - Vol.190, N.8. – P.745-752.). На сегодняшний день известно значительное число различных соединений, обладающих противолучевым действием (Владимиров В.Г.,

Красильников И.И., Арапов О.В.. Радиопротекторы: Структура и функция / Киев:

Наукова думка, 1989. – 258 с.; Hosseinimehr S.J. Foundation review: Trends in the development of radioprotective agents // Drugs Discov.

Today. – 2007. – Vol.12, N.19/20. – P.794-805; Васин М.В. Противолучевые лекарственные средства (учебная монография) / М.: Изд-во Российской медицинской академии последипломного образования, 2010. – 180 с.; Ильин Л.А., Ушаков И.Б., Васин М.В. Противолучевые средства в системе радиационной защиты персонала и населения при радиационных авариях // Мед. радиол. радиац. безоп. – 2012. – Т.57, №.3. – С.26-31.). Однако, плохая переносимость и токсичность этих радиопротекторов в эффективных дозах затрудняют их применение в онкологической практике – по существу, единственным допущенным к клиническому применению для профилактики осложнений радио- и химиотерапии является, разработанный в США, аминотиоловый радиопротектор амифостин (Kouvaris J.R., Kouloulias V.E., Vlahos L.J. Amifostine: the first selectivetarget and broad-spectrum radioprotector // Oncologist. – 2007. - Vol.12, N.6. – P.738-747;

Hensley M.L., Hagerty K.L., Kewalramani T. et al. American Society of Clinical Oncology 2008 clinical practice guideline update: use of chemotherapy and radiation therapy protectants // J. Clin. Oncol. – 2009. – Vol.27, N.1. – P.127-145.). В этой связи изучение механизмов противолучевого действия ингибиторов NOS и их особенностей фармакодинамического взаимодействия с радиопротекторами различных классов может явиться основой для разработки эффективных, приемлемых для лучевой терапии радиомодифицирующих средств (Bourgier C., Levy A., Vozenin M.C. et al Pharmacological strategies to spare normal tissues from radiation damage: useless or overlooked therapeutics? // Cancer Metastasis Rev. – 2012. – Vol.31, N.3-4. – P.699-712;

Рождественский Л.М. Актуальные вопросы поиска и исследования противолучевых средств // Радиац. биол. Радиоэкол. – 2013. – Т.53, №.5. – С.513-520; Fahl W.E. Effect of topical vasoconstrictor exposure upon tumorocidal radiotherapy // Int. J. Cencer. – 2014.

– Vol.135, N.4. – P.981-989.).

Не меньший интерес представляет также изучение антиангиогенного и противоопухолевого действия ингибиторов NOS. Клинический опыт применения ангиостатиков свидетельствует, что такие средства подавляют рост и метастазирование новообразований, повышают эффективность радио- и химиотерапии (Willett C.G., Duda D.G., di Tomaso E. et al. Complete pathological response to bevacizumab and chemoradiation in advanced rectal cancer // Nat. Clin. Pract.

Oncol. - 2007. - Vol.4, N.5. - P.316-321; Schmidt B., Lee H.J., Ryeom S. Combining Bevacizumab with radiation or chemoradiation for solid tumors: A review of the scientific rationale, and clinical trials // Curr. Angiogenes. 2012. – Vol.1, N.3. – P.169-179;

Корчагина А.А., Шеин О.И., Гурина В.П., Чехонин В.П. Роль рецепторов VEGFR в неопластическом ангиогенезе и перспективы терапии опухолей мозга // Вестник РАМН. – 2013. - № 11. – С.104-114.). В то же время, в клинической практике и в экспериментальных исследованиях влияние VEGF-специфических и мультикиназных ингибиторов, как правило, прогрессивно ослабевает вследствие развития резистентности опухоли к таргетным препаратам через активацию альтернативных ангиогенных путей и усиление промиграционного фенотипа некоторых неоплазий (Maity A., Bernhard E.J. Modulating tumor vasculature through signaling inhibition to improve cytotoxic therapy // Cancer Res. – 2010. – Vol.70, N 6. - P.2141-2145; Plate K.H., Scholz A., Dumont D.J. Tumor angiogenesis and anti-angiogenic therapy in malignant gliomas revisited // Acta Neuropathol. – 2012. – Vol.124, N.6. – P.763-775.).

Вместе с тем, данные о механизмах регуляции ангиогенеза позволяют рассматривать стойкое повышение синтеза NO в эндотелиоцитах и последующие NOзависимые процессы как общие звенья в путях действия основных факторов опухолевого ангиогенеза (Isenberg J.S., Martin-Manso G., Maxhimer J.B. et al.

Regulation of nitric oxide signaling by thrombospondin-1: implications for anti-angiogenic therapies // Nat. Rev. Cancer. - 2009. - Vol.9, N.3. - P.182-194; Miller T.W., Isenberg J.S., Roberts D.D. Molecular regulation of tumor angiogenesis and perfusion via redox signaling // Chem. Rev. – 2009. – Vol.109, N.7. – P.3099-3124; Cheng H., Wang L., Mollica M.

Nitric oxide in cancer metastasis // Cancer Lett. – 2014. – Vol.352, N.1. – P.1-7.) и неспецифическое антиваскулогенное влияние на опухоль можно ожидать при подавлении синтеза оксида азота. В этой связи химические ингибиторы NOS могут стать эффективными адъювантами, способными расширить возможности существующих методов лечения злокачественных новообразований.

Сложности разработки лекарственных средств с NOS-ингибирующим действием и множественность нерешнных вопросов их фармакологии определили комплексный характер данной работы, которая предусматривала сочетание аналитических и экспериментальных исследований по поиску конкурентных ингибиторов NOS с изучением зависимости биохимической активности веществ от их химического строения и изучением особенностей их фармакологических свойств.

Цель исследования: поиск в ряду линейных и циклических N,S-замещнных производных изотиомочевины эффективных конкурентных ингибиторов синтаз оксида азота, изучение особенностей их NOS-ингибирующей активности и ряда фармакологических свойств - вазопрессорного, радиомодифицирущего и противоопухолевого эффектов.

Задачи исследования:

1. Провести анализ особенностей химического строения производных ИТМ, определяющих их NOS-ингибирующие свойства. Осуществить направленный синтез ряда новых, оригинальных N,S-замещнных изотиомочевин, потенциально способных к конкурентному ингибированию NOS.

2. Изучить in vitro способности полученных соединений к подавлению каталитической активности изоформ NOS, оценить селективность и обратимость ингибирования. Оценить показатели острой токсичности, дозовые и временные параметры NOS-ингибирующего действия in vivo. Выделить наиболее перспективные соединения для фармакологических исследований.

3. Изучить влияние отобранных соединений на гемодинамику интактных животных.

Оценить их вазопрессорную активность на экспериментальных моделях различных гипотонических состояний.

4. Провести анализ взаимосвязи радиозащитной и NOS-ингибирующей активности производных ИТМ. Получить экспериментальные оценки показателей противолучевой активности изучаемых соединений по выживаемости подопытных животных и клоногенных гемопоэтических клеток при воздействии -излучения.

Изучить эффективность комбинированного действия производных ИТМ с известными радиопротекторами. Оценить их радиомодифицирующие способности на моделях лучевой терапии опухолей.

5. Изучить влияние отобранных соединений на рост и метастазирование карциномы лгких Льюис и механизмы их противоопухолевого и антиметастатического действия.

Оценить их противоопухолевую эффективность в комбинации с ангиостатическими препаратами, радио- и химиотерапией.

Научная новизна. Экспериментальным путм выявлены особенности молекулярной структуры N,S-замещнных ИТМ, определяющих их способность к конкурентному ингибированию NO-синтаз. Установлено влияние N-замещающего радикала на селективность таких соединений к изоформам NOS. Впервые показано, что N-замещающие изобутаноил, циклобутанкарбонил и циклогексанкарбонил повышают селективность N,S-замещнных ИТМ к ингибированию eNOS и iNOS, что позволяет рассматривать эти соединения как перспективную основу для создания NOS-ингибирующих фармакологических средств, действие которых затрагивает, в первую очередь, сосудистый гомеостаз.

Впервые показано, что изучаемые N,S-замещнные ИТМ, обладающие высокой NOS-ингибирующей активностью, в низких нетоксических дозах вызывают выраженное повышение сосудистого тонуса, которое сопровождается длительным гипертензивным эффектом при различных гипотониях, в том числе, резистентных к действию существующих вазопрессорных лекарственных средств.

Впервые исследована взаимосвязь NOS-ингибирующей и противолучевой активности S- и N,S-замещнных ИТМ. Установлено, что основным механизмом их противолучевого действия является индукция гипоксии. Экспериментально показано, что активные ингибиторы NOS из класса N,S-замещнных ИТМ способны оказывать эффективное противолучевое действие в менее токсических дозах, чем аминотиоловые радиопротекторы. Впервые выявлено выраженное фармакодинамическое взаимодействие ингибиторов NOS с существующими противолучевыми средствами различных классов. Показана способность исследованных N,S-замещнных ИТМ значительно повышать противолучевую эффективность существующих серотонин- и адренергических радиопротекторов.

Впервые экспериментально показано, что гипоксический механизм противолучевого действия исследованных N,S-замещнных ИТМ способен обеспечивать селективную защиту немалигнизированных тканей при лучевой терапии солидных опухолей.

Подтверждены данные о способности ингибиторов NOS проявлять антиангиогенное и противоопухолевое действие. Впервые установлено, что изученные N,S-замещнные ИТМ тормозят рост и подавляют метастазирование экспериментальных неоплазий, вызывая нарушение опухолевой васкуляризации, подавляя пролиферацию опухолевых клеток и усиливая их апоптотическую и некротическую гибель. Впервые показана способность этих соединений существенно повышать противоопухолевую эффективность радио- и химиотерапии опухолей.

Методы синтеза исследованных N-ацил-S-алкил-замещнных ИТМ и данные об их биохимических свойствах, вазапрессорной, противолучевой и противоопухолевой активности являются приоритетными и стали предметом 4 патентов Российской Федерации и одобренной заявки на изобретение.

Теоретическая и практическая значимость. Выявленные особенности молекулярной структуры оригинальных N,S-замещнных ИТМ, определяющие их способность к ингибированию NOS, установленная зависимость селективности изученных соединений к изоформам NOS от характера N-замещающего ацильного радикала создают основу для поиска и дизайна конкурентных ингибиторов NOS в ряду линейных и гетеро- циклических соединений, содержащих тиоамидиновый фрагмент – производных ИТМ, тиазола, тиазолина, тиазина.

Проведнные исследования выявили способность ингибиторов NOS из класса N,S-замещнных ИТМ оказывать в нетоксических дозах выраженное сосудосуживающее действие при различных гипотониях, в том числе, резистентных к действию существующих вазопрессоров. Полученные результаты свидетельствуют, что конкурентные тиоамидиновые ингибиторы NOS могут создать новые возможности в фармакотерапии гипотонических расстройств, при оказании экстренной и неотложной помощи, и в лечении критических состояний, а также позволяют рекомендовать соединение Т-1059 для дальнейшей разработки в качестве вазопрессорного и противошокового средства.

Результаты исследований показали, что конкурентные ингибиторы NOS из класса N,S-замещнных ИТМ обладают свойствами гипоксических радиопротекторов.

Показатели противолучевой эффективности и радиозащитной широты этих соединений, данные о значительном повышении противолучевой эффективности при комбинированном взаимодействии с имеющимися серотонин- и адренергическими радиопротекторами, и способности к селективной защите немалигнизированных тканей свидетельствуют, что конкурентные тиоамидиновые ингибиторы NOS могут иметь важное практическое значение при разработке более безопасных противолучевых и радиомодифицирующих средств. Полученные результаты позволяют рекомендовать соединение Т-1023 для дальнейшей разработки в качестве радиопротектора экстренного действия и средства профилактики осложнений лучевой терапии.

Установлено, что изучаемые производные ИТМ при субхроническом применении подавляют рост и метастазирование злокачественных опухолей, оказывая антиангиогенное и проапоптотическое действие. Полученные данные о способности этих соединений повышать эффективность радио- и химиотерапии позволяют рассматривать их как перспективную основу для разработки новых средств адъювантной терапии злокачественных новообразований.

Результаты проведнных исследований вошли в 5 патентов РФ на изобретение.

Методология и методы диссертационного исследования. Исследование носило комплексный характер, предполагающий сочетание экспериментальных исследований по поиску и дизайну эффективных ингибиторов NOS с изучением зависимости биохимической активности веществ от их молекулярной структуры, особенностей их биохимического действия и фармакологических свойств. При решении поставленных задач использован обширный арсенал методов исследований из различных областей – биохимии, клеточной биологии, морфологии, экспериментальной физиологии, радиобиологии, онкологии и фармакологии.

Исследования NOS-ингибирующей активности изучаемых соединений проведено in vitro – радиометрическим методом на изолированных изоформах NOS и методом проточной цитофлуориметрии на клеточных культурах; in vivo – методом ЭПРспектрометрии и фотометрическим методом. Изучение токсических свойств соединений проведено по методу острой токсичности. Изучение вазоактивных свойств соединений проведено общепринятыми методами экспериментальной физиологии и фармакологии на интактных животных и экспериментальных моделях острого геморрагического шока, эндотоксического шока, гипотензии при ганглиоблокаде и модели рефрактерной вазоплегии при эндотоксемии. Изучение противолучевых свойств соединений проведено общепринятыми методами экспериментальной радиобиологии по выживаемости животных и выживаемости клоногенных гемопоэтических клеток. Для оценки способности изучаемых соединений к профилактике осложнений радиотерапии использована экспериментальная модель лучевой терапии саркомы М-1. Исследование противоопухолевой и антиметастической активности соединений проведено на карциноме лгких Льюис с применением морфологических, иммуногистохимических и морфометрических методов. При анализе и обобщении полученных экспериментальных данных использованы адекватные методы статистики и прикладной математики.

Положения, выносимые на защиту Соединения класса N-ацил-S-алкил-замещнных изотиомочевин обладают 1.

способностью к обратимому, конкурентному ингибированию NOS, если их Sзамещающий радикал представлен низшим алкилом. Строение N-ацильных заместителей в этих соединениях оказывает существенное влияние на селективность их действия к изоформам NOS.

Ряд оригинальных N-ацил-S-алкил-замещнных изотиомочевин проявляют 2.

селективность к eNOS и iNOS, и в нетоксических дозах оказывают выраженную NOSингибирующую активность in vivo, что позволяет рассматривать данные соединения как перспективные для разработки на их основе новых фармакологических средств, влияющих, в первую очередь, на сосудистый гомеостаз.

Вазопрессорное действие исследованных производных ИТМ наблюдается на 3.

различных моделях гипотонических состояний, в том числе, резистентных к действию существующих вазопрессорных лекарственных средств, и отличается большой продолжительностью и отсутствием негативных эффектов, характерных для адреномиметиков.

Противолучевое действие алкил-замещнных изотиомочевин реализуется 4.

путм индукции циркуляторной гипоксии. Испытанные соединения обеспечивают эффективную радиационную защиту в менее токсических дозах, по сравнению с серосодержащими радиопротекторами, способны повышать противолучевую эффективность серотонин- и адренергических радиопротекторов, и проявляют селективную защиту немалигнизированных тканей при лучевой терапии солидных опухолей.

Исследованные ингибиторы NOS оказывают выраженное противоопухолевое и 5.

антиметастатическое действие, подавляя опухолевый ангиогенез и стимулируя апоптотическую и некротическую гибель опухолевых клеток и способны повышать эффективность радио- и химиотерапии новообразований.

Полученные данные свидетельствуют о перспективности разработки на основе 6.

наиболее активных соединений лекарственных средств принципиально нового механизма действия, способных расширить возможности фармакотерапии при лечении ряда распространнных заболеваний, при оказании экстренной, неотложной помощи и терапии критических состояний.

Степень достоверности. Достоверность экспериментальных данных обеспечивалась применением адекватных, верифицированных методов исследований и экспериментальных моделей, кондиционностью химических, биологических материалов и лабораторных животных, величиной экспериментальных выборок и воспроизведением результатов в независимых экспериментах. Анализ данных и их обобщение проведены с применением методов математической статистики и прикладной математики, соответствующих характеру данных и задачам экспериментов. Все выявленные закономерности, эффекты, обобщения и выводы подтверждались сериями независимых экспериментов и результатами статистического анализа.

Использование результатов исследований. Результаты исследований фармакологической активности соединения Т-1023 составили основу для разработки программы НИР МЗ РФ (№ гос. регистрации 01201461942) по проведению расширенного доклинического изучения Т-1023 в качестве средства лечения злокачественных новообразований, которая в настоящее время выполняется в МРНЦ им. А.Ф. Цыба.

Результаты изучения фармакологической активности соединения Т-1059 составили основу для разработки программы доклинических исследований вазопрессорного средства на основе ингибиторов NOS из класса N,S-замещнных производных ИТМ. Получено положительное решение на проведение этих исследований в рамках ФЦП «Фарма-2020» (протокол № ОП-4119/19 от 09 07-2014 г).

Апробация работы. Результаты работы были доложены и обсуждены на следующих научных конференциях: Национальная научно-практическая конференция с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 2001); Международная научно-практическая конференция «Активные формы кислорода, оксида азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2003); VIII Международная конференция «Биоантиоксидант»

(Москва, 2010); Третий съезд военных врачей медико-профилактического профиля Вооружнных сил Российской Федерации (Санкт-Петербург, 2010); Российская научная конференция с международным участием «Актуальные проблемы токсикологии и радиобиологии» (Санкт-Петербург, 2011); Вторая международная конференция «Новые направления в химии гетероциклических соединений»

(Железноводск, 2011); Всероссийская конференция «Радиохимия – наука будущего», посвящнной 100-летию со дня рождения А.Н. Несмеянова (Москва, 2011);

Всероссийская конференция с международным участием «Современные проблемы химической науки и образования», посвящнная 75-летию со дня рождения В.В.

Кормачева (Чебоксары, 2012); International conference «Radiation safety challengers in the 21th century» (Yerevan, 2012); Российская научная конференция «Острые проблемы разработки противолучевых средств: консерватизм или модернизация»

(Москва, 2012); Научно-практическая конференция «Перспективные технологии медицинского обеспечения вооружнных сил Российской Федерации» (СанктПетербург, 2013); Third International Conference on Radioecology & Environmental Radioactivity; ICRER 2014; (Barcelona, 2014); VII съезд по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность) (Москва, 2014).

Диссертация апробирована на научной конференции Экспериментального радиологического сектора Медицинского радиологического научного центра имени А.Ф. Цыба – филиала федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный медицинский исследовательский центр имени П.А. Герцена»

Министерства здравоохранения Российской Федерации 04.12.2014 г. (протокол № 279).

Публикации. Результаты диссертационного исследования опубликованы в 18 научных статьях, из них 11 - в рецензируемых изданиях перечня ВАК Минобрнауки РФ, 5 патентах РФ. Результаты доложены на научных мероприятиях, тезисы 21 доклада представлены в сборниках материалов.

Объм и структура диссертации. Работа изложена на 239 страницах, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, четырх глав результатов исследований, заключения, выводов, рекомендаций и списка литературы.

Работа содержит 45 таблиц и 33 рисунка. Список литературы содержит 569 источников, из которых 135 отечественных и 434 зарубежных изданий.

Личный вклад автора. Автору принадлежит основная роль в обосновании и выборе направлений исследований, проведении большинства экспериментов, анализе и обобщении полученных результатов, их публикации в научных изданиях, докладах и обсуждении на отечественных и международных конференциях, формулировании теоретических положений, выводов и рекомендаций. В экспериментальных работах, выполненных в соавторстве, вклад автора является определяющим, состоящим в участии на всех этапах – от постановки задач и реализации до обсуждения результатов в публикациях и докладах. Написание диссертации выполнено автором лично.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены на 850 белых аутбредных мышах обоего пола, на 2230 мышах-гибридах F1 (CBAC57BL6j) обоего пола, на 35 самках мышей C57BL6j и на 230 самцах крыс Wistar, которые были получены из питомника ФГБУН НЦБМТ ФМБА России и прошли 20-суточный карантин в виварии МРНЦ. Содержали животных в соответствии с нормами группового размещения в условиях естественного освещения с принудительной 16-кратной вентиляцией, при температуре 18-20C и относительной влажности воздуха 40-70%. Животные имели свободный доступ к питьевой воде и корму, и получали стандартный (ГОСТ Р50258-92) корм ПК-120-1 (ООО «Лабораторснаб», Россия). Все работы с животными выполнены на основе стандартных операционных процедур, принятых в МРНЦ, которые соответствуют правилам Европейской Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для научных целей (ETS 123, Strasbourg, 1986).

Использованные соединения и фармакологические препараты. Методы синтеза изучаемых в работе N,S-замещнных ИТМ разработаны в лаборатории радиационной фармакологии МРНЦ им. А.Ф. Цыба и защищены патентами РФ (RU2338538 от 20.11.2008; RU2353614 от 27.04.2009, RU2475479 от 20.02.2013) и патентной заявкой (№082603 от 29.11.2013). Методы синтеза использованных S-[2алкил(арил)сульфонил]-замещнных производных S-этил(винил)-ИТМ разработаны в ФГБУН ИОХ им. Н.Д. Зелинского РАН (а.с. №83085 от 1.11.1974, №90803 от 6.10.1975 и №97821 от 2.8.1976). Наработка всех производных ИТМ для исследований проведена в лаборатории радиационной фармакологии МРНЦ.

При проведении исследований использовались в фармакопейных формах следующие препараты сравнения и вспомогательные средства – радиопротекторы амифостин (MedImmun Pharma BV, Нидерланды), дифетур (НПЦ «Фармзащита»

ФГУП ФМБА, Россия), цистамина дигидрохлорид (Sigma-Aldrich, Москва), серотонина адипинат (Sigma-Aldrich, Москва), мексамин (Sigma-Aldrich, Москва), индралин (Б-190; НПЦ «Фармзащита» ФГУП ФМБА, Россия), 1-адреномиметик фенилэфрин (мезатон, ICN Полифарм, Россия), цитостатик циклофосфамид (циклофосфан, ООО «Компания Деко», Россия), ингибитор VEGF бевацизумаб (авастин, Roche Diagnostics GmbH, Германия), ганглиоблокатор азаметония бромид (пентамин; ОАО Дальхимфарм, Россия) и тиопентал натрия (Sandoz, Австрия).

Все соединения применялись в виде асептических водных растворов, приготовленных ex tempore. Исключение составляли соединение Т-1049, суспензию которого готовили с применением Tween-80 (Sigma-Aldrich, Москва) в соотношении 1:10, и индралин, который растворяли в 1% растворе винной кислоты.

Исследование токсичности изучаемых соединений проведено на самцах F1 (CBAC57BL6j) при однократном в/б введении с использованием метода пробитанализа по Литчфилду-Уилкоксону (Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.Л. Беленький. - Л.: Гос. изд-во мед. литературы, 1963. – 146 с.).

Исследования NOS-ингибирующей активности. Скрининговая оценка ингибирующей активности изучаемых ИТМ и их селективности проведена in vitro радиометрическим методом (van Eijk H.M., Luiking Y.C., Deutz N.E. Method using stable isotopes to measure nitric oxide synthesis in the L-arginine/NO pathway in health and disease // J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. - 2007. - Vol.851, N.1-2. P.172-185.) на рекомбинантных изоформах NOS человека (Enzo Life Sciences Inc., США) с применением набора реагентов NOS Activity Assay Kit (Cayman Chemical, США). Активность ферментов оценивали по скорости накопления [3H]-L-цитруллина, которую определяли при помощи сцинтилляционного счтчика Beckman LS 6000 (Beckman Coulter, США).

Исследование обратимости NOS-ингибирующего действия изучаемых ИТМ проведено на культурах клеток меланомы В16 и клеток HeLa методом флуориметрии (Nagano T., Yoshimura T. Bioimaging of nitric oxide // Chem. Rev. – 2002. – Vol.102, N.4.

– P. 1235-1269.). Клетки, после 2 часов инкубации с изучаемыми соединениями, отмывали в PBS и инкубировали 1 час с зондом DAF-2DA (Sigma-Aldrich, США).

Активность синтеза NO оценивали по флуоресценции DAF-2T, которую измеряли на проточном цитофлуориметре FACS Calibur (BDIS, США).

Исследования влияния изучаемых соединений in vivo на продукцию NO в биологических тканях проведены на самцах мышей F1 (CBAC57BL6j) методом ЭПРспектрометрии с диэтилдитиокарбаматной спиновой ловушкой (Sigma-Aldrich, США) (Vanin A.F., Poltorakov A.P. NO spin trapping in biological systems // Front Biosci.

(Landmark Ed.) - 2009. - Vol.14. - P.4427-4435.). Образцы тканей печени и мозга брали на исследование через 1 час после введения изучаемых ИТМ. Спектры ЭПР регистрировали на спектрометрах EMX-8 и ESP-300E (оба: Bruker, Германия).

Содержание NO оценивали по амплитуде первой компоненты триплетной структуры спектра.

Исследования влияния изучаемых соединений in vivo на содержание NO2-/NO3- в биологических тканях проведено на самцах крыс Wistar фотометрическим методом с применением реагента Грисса (Promega, США) (Tsikas D. Analysis of nitrite and nitrate in biological fluids by based on the Griess reaction: appraisal of the Griess reaction in the Larginine/nitric oxide area of research // J. Chromatogr. B. Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. - 2007. - Vol.851, N.1-2. - P.51-70.). Образцы крови, тканей печени и мозжечка брали в опыт через 1 сутки после введения изучаемых ИТМ. Депротеинизацию плазмы и гомогенатов проводили сульфатом цинка, нитраты восстанавливали металлическим цинком. Оптическую плотность измеряли на фотометре КФК-3-01 (ЗОМЗ, Россия).

Исследование влияния на сердечно-сосудистую систему изучаемых соединений проведено на интактных самцах крыс Wistar и на моделях различных гипотоний. У животных под тиопенталовым наркозом с помощью полиграфа RMNikhon Kohden, Япония) или комплекса PowerLab 8/30 (ADInstruments, Австралия) регистрировали ЭКГ и показатели ЧСС, ЧДД, АДС и АДД в левой сонной артерии и ЦВД в яремной вене. Для воспроизведения острого геморрагического шока проводили забор крови из правой сонной артерии в течение 8-12 мин в объме 3,0 мл на 100 г массы тела. Для создания острого эндотоксемического шока вводили ЛПС E.coli (Sigma-Aldrich, США) однократно, в/в, 18 мг/кг. Для создания гипотонии при ганглиоблокаде вводили азаметония бромид (однократно, в/б, 12 мг/кг). Для воспроизведения рефрактерной вазоплегии проводили двукратное в/б введение ЛПС в дозе 5 мг/кг: первое - за 18 часов до исследований, второе – в начале исследования.

После развития у крыс стабильной гипотонии повторяли регистрацию показателей.

Затем животным опытных групп однократно в/б вводили исследуемые соединения и продолжали мониторинг показателей в течение последующих 90-120 минут. В этих опытах в качестве препарата сравнения использован фенилэфрин (однократно, в/б, 0,5 мг/кг). В исследованиях на интактных животных, наряду с указанными показателями, каждые 30 минут измеряли измеряли МОК методом термодилюции, и в дальнейшем прово-дили расчт общепринятых гемодинамических показателей - УПСС, УО и СИ.

Исследования радиозащитных свойств изучаемых соединений проведены на аутбредных мышах и мышах-гибридах F1 (CBAC57BL6j) обоего пола. Воздействие излучением 60Co на животных проводили в группах по 12-15 особей на установках «Гаммацелл-220» (Канада) с мощностью дозы 310-330 мГр/с и «Луч-2» (Россия) с мощностью дозы 75-90 мГр/с. Изучаемые ИТМ вводили в/б за 15-20 до лучевого воздействия. При сочетанном применении с другими радиопротекторами соединения вводили раздельно с интервалом 5-10 минут. Радиозащитные эффекты оценивали по выживаемости животных и выживаемости клоногенных 30-суточной гемопоэтических клеток, которую изучали методами селезночных эндо- и экзоколоний (Радиобиология стволовых клеток / А.Г.

Коноплянников - М.:

Биоинформсервис, 2009. – 171 с.). Показатели радиозащитной широты и эффективности оценивали согласно руководству для противолучевых средств (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей ред. члена-корр. РАМН, проф.

Р.У.Хабриева. 2-изд., перераб. и доп. – М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. – 832 с.).

Исследования радиомодифицирующего действия изучаемых ИТМ при радиотерапии проведены на самцах крыс Wistar на модели лучевой терапии перевиваемой саркомы М-1 при локальном облучении в дозах 32 и 36 Гр. Динамику опухолевого роста оценивали морфологическими методами. Тяжесть и течение острых лучевых повреждений кожи оценивали по классификации RTOG/EORTC-95 (Cox J.D., Stetz J., Pajak T.F. Toxicity criteria of the Radiation Therapy Oncology Group (RTOG) and the European Organization of Research and Treatment of Cancer (EORTC) // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. – 1995. – Vol.31, N.5. – P.1341-1346; Аклеев А.В., Радиобиологические закономерности реакции нормальных тканей при лучевой терапии опухолей // Радиац. биол. Радиоэкол. – 2014. – Т.54, №.3. – С.241-255 2014).

Исследования противоопухолевой активности изучаемых ИТМ при субхроническом введении проведено на самцах мышей F1 (CBAC57BL6j) на перевиваемой карциноме лгких Льюис. Динамику роста и активность метастазирования карциномы оценивали морфологическими методами.

Противоопухолевое и антиметастатическое действие оценивали по индексам ТРО, ИИМ и длительности задержки роста (Хабриев Р.У., 2005). Этими методами исследовалась и противоопухолевая эффективность в сочетании с бевацизумабом, циклофосфаном и лучевым воздействием. Гистологические и иммуногистохимические исследования влияния изучаемых ИТМ на морфологию тканей карциномы Льюис проведены по методике, изложенной в (М.В. Филимонова, В.В.

Южаков, Л.И. Шевченко и др. Экспериментальное исследование противоопухолевой активности нового ингибитора синтаз оксида азота Т1023 // Молекулярная медицина.

– 2015. - № 1. – С.61-64.).

Статистические методы. При первичной обработке данных проводили проверку наличия сомнительных значений с применением критериев Диксона и Ирвина.

Сомнительную варианту классифицировали как грубую погрешность при p0,05 и исключали из дальнейшего рассмотрения. Проверку различий проводили с применением непараметрических критериев: при парном сравнении использовали Uкритерий Манна-Уитни и двухвыборочный критерий Колмогорова-Смирнова, а при множественном – ранговый дисперсионный анализ Краскела-Уоллиса и критерии Даннета и Данна. Различия выживаемости животных оценивали по точному критерию Фишера. Во всех случаях межгрупповые различия считали достоверными при p0,05.

Корреляционный и регрессионный анализ, и статистические расчты проведены с использованием программ Exel 2003 (Microsoft, США), Origin 7.5 (OriginLab, США) и Statistica 7.0 (StatSoft Inc., США).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Обоснование химической области фармакологического скрининга На начальном этапе поисковых работ нами было показано, что для проявления аффинности N,S-замещнных ИТМ к NOS важным является наличие S-алкильного заместителя.
Но увеличение этого радикала выше С4-5 ослабляло ингибирующую активность таких ИТМ - оптимальными являлись низшие алкилы C2-3. Другим важным моментом являлся характер заместителей атома углерода N-радикала, контактирующего с атомом азота тиоамидиновой группы. Производные ИТМ проявляли аффинность к NOS только, если в этом месте находилась –CH2- или –COгруппа. Причм, ацильные производные, как правило, проявляли большую ингибирующую активность в сравнении с алкильными аналогами.

В этой связи, было принято целесообразным вести поиск эффективных конкурентных ингибиторов NOS в ряду N-ацил-S-алкил-замещнных ИТМ общей формулы:

где R1 – алкильная/арильная группа C1-14;

R2 – алкильная группа C2-3;

HX – неорганическая/органическая кислота.

Структура и физико-химические свойства синтезированных ИТМ В рамках исследований были синтезированы, идентифицированы и охарактеризованы 16 новых, не описанных ранее производных ИТМ. Большинство соединений имели в качестве S-заместителя этил или изопропил (табл. 1). Nзамещающий радикал варьировал в широких пределах – от ацетила до пальмитинатоила, и был представлен как линейными, так и циклическими углеводородами.

–  –  –



Pages:   || 2 | 3 |

Похожие работы:

«РАГИМОВ АЛЕКСАНДР ОЛЕГОВИЧ ЭКОЛОГО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ РОЛЬ ПОЧВ В ФОРМИРОВАНИИ УРОВНЯ БЛАГОПОЛУЧИЯ НАСЕЛЕНИЯ ВЛАДИМИРСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность – 03.02.08 – экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена на кафедре почвоведения Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Владимирский государственный университет имени Александра...»

«ФЕДИН АНДРЕЙ ВИКТОРОВИЧ КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ РИНОСИНУСИТОВ 14.03.09. – аллергология и иммунология 14.01.03. – болезни уха, горла и носа АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Пенза – 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Пензенский институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения...»

«Бирюкова Лидия Игоревна Диагностика, клинико-морфологическая характеристика и лечение накожного папилломатоза и дерматоза внутренней поверхности ушной раковины у лошадей 06.02.04 – ветеринарная хирургия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Москва 2015 Работа выполнена в ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии МВА имени К.И. Скрябина» Научный руководитель: Сотникова Лариса Федоровна, доктор...»

«ДРОБОТ Елена Игоревна РЕАКТИВНОСТЬ КЛЕТОК ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННОЙ РАЗНЫМИ ПЛАЗМИДНЫМИ ВАРИАНТАМИ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2014 Работа выполнена в лаборатории клеточной биологии и гистопатологии ФГБУ «Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова» СО РАМН. Научный...»

«Чичерина Екатерина Александровна БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУЛЕНТНЫХ ШТАММОВ ВИРУСА БОЛЕЗНИ МАРЕКА 06.02.02. «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (г. Владимир) Ирза Виктор Николаевич, доктор ветеринарных...»

«ВАРЕНЦОВА Алиса Алексеевна АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ ГЕНОВ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 03.02.02 «Вирусология» Aвтореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир – 2014 Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии)...»

«Фомина Светлана Григорьевна ПЕЙЗАЖ ЭНТЕРОВИРУСОВ У ДЕТЕЙ С ОСТРОЙ КИШЕЧНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ 03.02.02. – вирусология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора. Новикова Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Надежда Алексеевна...»

«Аужанова Асаргуль Дюсембаевна ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И БИОПРЕПАРАТА РИЗОАГРИН НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПОЧВЫ, АДАПТИВНОСТЬ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ 03.02.08 – экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Омск – 2015 Работа выполнена на кафедре экологии, природопользования и биологии ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет им. П.А.Столыпина» Поползухина Нина Алексеевна...»

«ДОБРЕНЬКОВ ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЦЕНОТИЧЕСКИХ ОТНОШЕНИЙ БАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ ПОЛОСТИ РТА И МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИНЦИПОВ БИОКОРРЕКЦИИ 03.02.03 – Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 эпидемиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва – 2014 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки « Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора Научный консультант: Заслуженный деятель науки РФ, профессор, доктор медицинских наук Ющенко...»

«БЕРЕЗИНА Елена Сергеевна ПОПУЛЯЦИОННАЯ СТРУКТУРА, ОСОБЕННОСТИ МОРФОЛОГИИ И ПОВЕДЕНИЯ И РОЛЬ ДОМАШНИХ СОБАК И КОШЕК В РАСПРОСТРАНЕНИИ ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫХ ИНФЕКЦИЙ В РОССИИ 03.02.04 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Омск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный педагогический университет» и ФБУН «Омский НИИ...»

«Потапова Анна Викторовна ВЛИЯНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ ТРОФИЧЕСКИХ СУБСТРАТОВ ТЯЖЁЛЫМИ МЕТАЛЛАМИ И ХЛОРОРГАНИЧЕСКИМИ СОЕДИНЕНИЯМИ НА КАЧЕСТВО ЛОСИНОГО МОЛОКА 03.02.08 – Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Костромской государственный университет им. Н. А. Некрасова» Научный руководитель: доктор биологических наук, Баранов Александр Васильевич Официальные оппоненты: Марзанов Нурбий...»

«Солнцев Роман Викторович Лесоводственная эффективность осушительной мелиорации в заболоченных сосняках и на их вырубках в условиях Среднего Урала (на примере стационара «Северный»). 06.03.02. – Лесоведение, лесоводство, лесоустройство и лесная таксация. АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Екатеринбург – 2014 Работа выполнена на кафедре лесной таксации и лесоустройства ФГБОУ ВПО «Уральский государственный лесотехнический...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени кандидата биологических наук Брянск 2014 Работа выполнена на кафедре экологии и рационального природопользования ФГБОУ ВПО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского» Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Анищенко...»

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Брянск 2014 Работа выполнена на кафедре экологии и рационального природопользования ФГБОУ ВПО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского» доктор сельскохозяйственных наук, профессор Научный...»

«Абдуллоева Елена Юрьевна БИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ БОЛЕЗНИ МАРЕКА ИЗ ВИРУСА 1 И 3 СЕРОТИПОВ 03.02.02 «Вирусология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир – 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» ФГБУ «ВНИИЗЖ» доктор ветеринарных наук Камалова Научный руководитель: Наталья Евгеньевна Еремец Владимир Иванович – доктор Официальные оппоненты:...»

«Подсвирова Ирина Александровна Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре 03.02.03 – микробиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Москва — 2014 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Ставропольский государственный медицинский университет Минздрава Российской Федерации Научные руководители: Миронов Андрей...»

«АЛЕКСЕЕВА Татьяна Васильевна БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ ФРАКЦИЙ ГЛУБОКОЙ ПЕРЕРАБОТКИ НИЗКОМАСЛИЧНОГО СЫРЬЯ: БАЛАНСИРОВАНИЕ ПНЖК СОСТАВА, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА, НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ Биотехнология пищевых продуктов и биологических 05.18.07 – активных веществ Технология и товароведение пищевых продуктов 05.18.15 – и функционального и специализированного назначения и общественного питания АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Воронеж Работа...»

«Дандал Али Шебли ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир-2015 Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ) Россельхознадзора и в ФГБАОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Научный руководитель: Макаров Владимир...»

«Герасимов Максим Александрович Аэрозольная санация воздушной среды кролиководческих помещений при профилактике респираторных заболеваний кроликов 06.02.05ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарносанитарная экспертиза АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена ФГБОУ ВПО «Московская государственная сельскохозяйственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» на кафедре...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.