WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 |

«ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЙ ДНК-МАРКИРОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ ЯБЛОНИ ...»

-- [ Страница 3 ] --
* ** * *** **** …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

Vfа2 AGCTTAGAAAAATTGTACATATCTGAAAATCATTTTAATGGAACTTTCACAGAAGTTATT 1346

Vfа4 AGCTTAGAAAAATTGGACATATCTGTAAATCAATTTAATGGAACTTTCACAGAAGTTATT 1156

Vfа1 AGCTTAGAAAAATTGGACATATCTGGAAATCATTTTAATGGAACTTTCACAGAAGTTATT 1794

*************** ********* ****** *************************** R

Vfа2 GGTCAACTCAAAATGCTAACGGATTTGGATATATCTTATAATTCGTTAGAAGGTGTGGTG 1406

Vfа4 GGTCAACTCAAAATGCTAACGTATTTGGATATATCTTATAATTCGTTAGAAAGTGCAATG 1216

Vfа1 GGTCAACTCAAAATGCTAACGGATTTGGATATATCTTATAATTGGTTTGAAGGTGTGGTG 1854

*************** ********* ****** *************************** Рисунок 6 – Позиции праймеров на последовательностях доминантного аллеля гена Vf – Vfа4 и его гомологов – Vfа1 и Vfа2.

Нуклеотидная последовательность созданного дополнительного обратного праймера ДНК-маркера гена Vf: 5` TGACTTTATTCCATCTG 3`.

В ходе экспериментальной проверки выявили синтез продукта, специфичного для доминантного аллеля ПЦР размером около 140 п. н., однако помимо этого синтезировался продукт размером около 510 п. н., который не препятствует идентификации доминантного аллеля (рисунок 7).

–  –  –

Как видно из рисунка 7, неспецифический фрагмент размером около 510 п. н. не влияет на процесс идентификации доминантного аллеля Vf-гена, следовательно, созданный ДНК-маркер может применяться для мультиплексной ПЦР при одновременной идентификации гена Vf с генами устойчивости яблони к мучнистой росе. Это обусловлено тем, что размеры продуктов ПЦР основных наиболее часто применяемых маркеров к генам Pl-1, Pl-2 Pl-w значительно отличаются от размера ПЦР-фрагмента разработанного праймера, специфичного для доминантного аллеля гена Vf размером около 140 п. н. (таблица 6).

–  –  –

Согласно таблице 6, ПЦР-продукт разработанного маркера размером около 510 п. н. никак не отражается на достоверности идентификации Vf-гена.

Тем не менее, существует вероятность того, что данный фрагмент может снижать эффективнсть использования разработанного ДНК-маркера в мультиплексной идентификации. Таким образом, данное исследование должно быть продолжено по следующим направлениям:

– в связи с тем, что неспецифический продукт 510 п. н. не перекрывает по размеру фрагменты амплификации маркеров Pl-1, Pl-2, Pl-w, провести апробацию мультиплексных комбинаций данного маркера в сочетании с маркерами генов устойчивости яблони к мучнистой росе;

– с учетом полученных экспериментальных данных продолжить разработку нового ДНК-маркера к гену Vf с размером единичного целевого фрагмента 140-170 п. н., без синтеза неспецифически амплифицированных фрагментов.

–  –  –

Для изучения аллельного полиморфизма гена самонесовместимости яблони целевыми были выбраны аллели, наиболее распространенные в мировом генофонде яблони в соответствии с литературными данными: S2, S3, S7, S10 [Hegeds A., 2006].

В выборку для исследования вошли перспективные и введенные в Госреестр селекционных достижений, допущенных к использованию в СевероКавказском регионе сорта яблони селекции СКЗНИИСиВ и ВНИИСПК.

Для апробации системы молекулярно-генетической идентификации аллелей гена самонесовместимости яблони были отобраны распространенные аллели данного гена: S2, S3, S7, S10 и исследовано 33 сорта. На начальном этапе работы для ДНК-маркеров к изучаемым аллелям гена самонесовместимости подобрали оптимальные температурно-временные параметры полимеразной цепной реакции: 5 минут при 94 С – начальная денатурация; следующие 35 циклов: 30 секунд денатурация при 94 С, 40 секунд отжиг праймеров при 60 С, 30 секунд синтез при 72 С. Последний цикл синтеза 5 минут при 72 С [Супрун И.И. и др., 2010].

Оптимальной концентрацией дезоксинуклеотидтрифосфатов и праймеров были определены концентрации 0,1 мкM и 0,3 мкM соответственно. Следует отметить, что первоначально использовали концентрацию дезоксинуклеотидтрифосфатов 0,3 мкM, однако, снижение концентрации данного компонента реакционной смеси позволило снизить синтез «нецелевых»

фрагментов, без ухудшения синтеза фрагментов ПЦР, с областей, фланкируемых ДНК-маркерами целевых аллелей гена самонесовместимости.

Это повысило эффективность ПЦР-идентификации искомых аллелей.

В ходе анализа полиморфизма локуса S-гена стандартами послужили сорта иностранной селекции с известным из литературных данных аллельным набором S-локуса: Голден Делишес – S2, S3; Гала – S5; Айдаред – S7;

Мекинтош – S10 [Супрун И.И. и др., 2010].

На рисунках 8-10 продемонстрированы примеры электрофоретического разделения продуктов ПЦР с ДНК-маркерами к аллелям гена самонесовместимости, изученными в ходе выполнения исследований. На всех представленных электрофореграммах стрелками указан размер фрагментов маркера молекулярного веса ДНК, наиболее близких по размеру к целевым продуктам ПЦР у каждого из аллелей.

–  –  –

МВ К МВ К

Рисунок 8 – Электрофореграмма ДНК-идентификации аллеля S2 (450 п. н.), где МВ-маркер молекулярного веса ДНК («шаг» маркера 100 п. н.);

К – положительный контроль (сорт Голден Делишес - стандарт «+» по аллелям S2; S3). 1-15 сорта яблони: 1 – Корей, 2 – Орловское Полесье, 3 – Старт, 4 – Имрус, 5 – Юбиляр, 6 – Свежесть, 7 – Строевское, 8 – Первинка, 9 – Славянин, 10 – Орловский Пионер, 11 – Болотовское, 12 – Ноктюрн, 13 – Василиса, 14 – Любава

–  –  –

МВ К МВ К

Рисунок 9 – Электрофореграмма ДНК-идентификации аллеля S3 (500 п. н.), где МВ – маркер молекулярного веса ДНК («шаг» маркера 100 п. н.);

К – положительный контроль (сорт Голден Делишес – стандарт «+» по аллелям S2; S3). 1-15 сорта яблони: 1 – Красный янтарь, 2 – Орловское Полесье, 3 – Старт, 4 – Кармен, 5 – Юбиляр, 6 – Свежесть, 7 – Строевское, 8 – Первинка, 9 – Славянин, 10 – Орловский Пионер, 11 – Болотовское, 12 – Имрус, 13 – Любава, 14 – Тайна 200 п.н.

МВ 1 2 9 МВ 10 11 12 13 14 15 16 17 18

–  –  –

Из результатов исследований видно, что у сортов яблони Строевское, Болотовское, Ноктюрн (рис. 8); Старт, Свежесть, Имрус, Тайна (рис. 9); Золотое летнее, Талида, Родничок, Талисман, Екатеринодарское, Юбилей Москвы (рис. 10) присутствуют ПЦР-фрагменты одного размера с соответствующими сортами-стандартами иностранной селекции (от 209 до 500 п. н.). Это свидетельствует о наличии у перечисленных сортов яблони искомых аллелей гена самонесовместимости [Супрун И.И. и др., 2011].

По результатам молекулярно-генетического анализа отечественных сортов яблони были идентифицированы целевые аллели гена самонесовместимости, представленные в таблице 7.

–  –  –

Согласно таблице 7, на каждый генотип перечисленных сортов яблони приходится от одного до трех различных аллелей гена самонесовместимости.

Несмотря на то, что в ходе выполнения исследования проводили идентификацию только четырех аллелей из всех известных для яблони, у каждого из изученных сортов был идентифицирован как минимум один из аллелей. Для ряда сортов, таких как Болотовское (S2 S3), Золотое летнее (S3 S10), Имрус (S3 S10), Казачка кубанская (S3 S10), Красный янтарь (S2 S7), Маяк станичный (S3 S10), Рассвет (S2 S7), Солнышко (S3 S7), Строевское (S2 S3), Талида (S2 S10), а также триплоидного сорта Союз (S2 S7 S10), аллельный состав S-гена был установлен полностью [Suprun I.I. et al., 2011].

Частота встречаемости выявленных у исследованных образцов яблони аллелей S-гена показана на рисунке 11.

Рисунок 11 – Частота встречаемости аллелей S-гена в изученных образцах яблони Как видно из рисунка 11, наиболее распространенным оказался аллель S10, который был обнаружен у 15 сортов яблони: Аленушкино, Афродита, Василиса, Екатеринодарское, Золотое летнее, Имрус, Казачка кубанская, Корей, Любава, Маяк станичный, Родничок, Славянин, Союз, Талида и Юбиляр.

Аллели S2, S3, S7 выявлены у 10, 9 и 10 генотипов соответственно.

При анализе имеющейся информации о происхождении изученных отечественных сортов яблони стало видно, что наиболее распространенными родительскими формами являются американские сорта яблони Голден Делишес, Прима и Айдаред несущие соответственно S2 S3, S2 S10 и S3 S7аллели гена самонесовместимости.

Соответственно, указанные аллели широко представлены в таких сортах яблони как: Аленушкино (S10), Афродита (S10), Болотовское (S2 S3), Василиса (S10), Екатеринодарское (S10), Золотое летнее (S3 S10), Имрус (S3 S10), Казачка кубанская (S3 S10), Корей (S10), Кубанское багряное (S3), Любава (S10), Маяк станичный (S3 S10), Ноктюрн (S2), Персиковое (S2), Родничок (S2), Свежесть (S3), Славянин (S10), Строевское (S2 S3), Тайна (S2), Талида (S2 S10). Также у многих изученных сортов яблони обнаружен S7-аллель гена самонесовместимости: Дин Арт (S7), Зефир (S7), Красный янтарь (S2 S7), Орловское полесье (S7), Зимнее утро (S7), Рассвет (S2 S7), Солнышко (S3 S7), Союз (S2 S7 S10), Старт (S7), Юбилей Москвы (S7).

Таким образом, данные об аллельном составе S-гена у изученных сортов яблони соответствуют имеющимся сведениям об их происхождении, подтверждая достоверность молекулярно-генетических методов.

Информация об аллельном составе гена самонесовместимости у изученных сортов яблони может быть использована для подбора оптимальных комбинаций при гибридизации с целью ускорения селекционного процесса и получения максимального числа гибридных сеянцев. Наряду с этим, знание аллельного состава S-гена может позволить прогнозировать эффективность перекрестного опыления сортов и форм с различными комбинациями аллелей гена, что немаловажно в случае разработки сортовых схем садовых насаждений у плодовых культур, в том числе и яблони.

Для повышения эффективности перекрестного опыления сортов яблони важно использовать в качестве родительской пары сорта, несущие различные комбинации аллелей гена самонесовместимости. С этой целью, при подборе наиболее эффективных опылителей необходимо, чтобы сорта из группируемой пары отличались как минимум по одному аллелю S-гена или, что еще более предпочтительно, несли разные аллельные пары. Главное условие – отсутствие полного совпадения аллельной комбинации [Hegeds A., 2006].

Из изученных сортов яблони отечественной селекции были определены оптимальные с точки зрения совместимости группы, представленные в таблице 8.

–  –  –

Как видно из таблицы 8, наибольшим количеством совместимых при опылении сортов яблони обладает сорт Фея селекции ГНУ СКЗНИИСиВ, у которого не обнаружили ни одного из четырех искомых аллелей, а наименьшим – Союз селекции СКЗНИИСиВ совместно с ВНИИСПК, несущий 3 распространенных аллеля S-гена: S2, S7 и S10. Cреднее количество совместимых сортов по данной выборке составило около восемнадцати – это такие сорта как: Аленушкино, Афродита, Василиса, Екатеринодарское, Корей, Любава, Родничок, Славянин, Юбиляр. Варьирование числа подходящих для перекрестного опыления сортов составило от 10 (Талида) до 24 сортов яблони (Кубанское багряное, Свежесть). Полученные данные представляют ценный исходный материал для селекции, подтверждающий эффективность и актуальность методов ДНК-маркирования.

В связи с широким вовлечением в селекционный процесс сортов иностранной селекции, а также интродуцированных и культивируемых в южном регионе России, были определены оптимальные с точки зрения совместимости пары для изученных сортов яблони и наиболее распространенных иностранных доноров хозяйственно-ценных признаков с известным из литературных источников аллельным составом S-гена (таблица 9).

–  –  –

Согласно таблице наибольшее количество совместимых с 9, исследованными отечественными сортами яблони селекции ГНУ СКЗНИИСиВ равно 33. Это характерно для таких сортов яблони иностранной селекции как Алкмене, Глостер и Фуджи. Наименьшее количество совместимых при опылении сортов яблони обнаружено у Айдаред (S3 S7), Либерти (S3 S5 S10) и Редфри (S3 S7) – 15, 13 и 11 соответственно.

Cреднее количество совместимых сортов по данной выборке составило около двадцати – это такие сорта как: Гала (S2 S5), Голден Делишес (S2 S3), Джонатан (S7 S9), Присцилла (S3 S9), Спартак (S9 S10), Фиеста (S3 S5), Эльстар (S3 S5). Варьирование числа подходящих для перекрестного опыления сортов составило от 11 (Редфри) до 33 сортов яблони (Алкмене, Глостер, Фуджи). Данные, представленные в таблице 8 необходимы не только для рационального планирования оптимальных комбинаций при гибридизации с целью максимального количества гибридного потомства, но и разработки сортовых схем садовых насаждений для повышения эффективности опыления.

3.5 Исследование полиморфизма микросателлитных локусов сортов яблони отечественной селекции Одно из наиболее перспективных направлений применения микросателлитных маркеров при работе с генетическими ресурсами растений – это определение структуры коллекций и степени генетического сходства, а также идентификация и ДНК-паспортизация образцов коллекции и решение спорных вопросов авторства сортов растений. На сегодняшний день микросателлитные ДНК-маркеры являются наиболее распространенным типом ДНК-маркерных систем, используемых в данных исследованиях.

Идентификация и паспортизация сортов может выполняться на основании информации об аллельных состояниях использованных маркеров у каждого отдельно взятого сорта.

В связи с высокой степенью полиморфизма SSR-маркеров был использован относительно небольшой набор микросателлитных маркеров – 12, являющийся достаточным для оценки уровня полиморфизма в исследуемой выборке генотипов согласно данным, полученным в иностранных работах по изучению генетического разнообразия яблони.

Немаловажными критериями при отборе микросателлитных маркеров для изучения обширного генофонда, являются уровень аллельного полиморфизма, выявляемого по каждому из локусов при анализе целевой генплазмы, и высокое «качество» амплификации, позволяющее наиболее эффективно и достоверно проводить анализ их полиморфизма. Кроме того, при первоначальном отборе маркеров учитывается уровень полиморфизма, идентифицированный у них при анализе мирового генофонда, а также позиция на генетической карте вида – наиболее оптимально использовать набор SSR-маркеров, равномерно распределенных по геному.

При апробации отобранных 12 микросателлитных маркеров был оптимизирован ряд экспериментальных параметров. В результате проведенных лабораторных исследований была определена следующая схема полимеразной цепной реакции: 5 минут при 94 С – начальная денатурация, следующих 30-33 цикла в зависимости от маркера: 30 секунд денатурация при 94 С, 30 секунд отжиг праймеров при 60 С, 30 секунд синтез при 72 С; последний цикл синтеза 3 минуты при 72 С. Температуру отжига праймеров подбирали индивидуально для праймерных комбинаций [Супрун И.И. и др, 2011]. В качестве стандарта при отработке экспериментальных параметров ПЦР использовали ДНК сорта яблони Прима и Голден Делишес в связи с наличием литературных данных о размере фрагментов по SSR-локусам, использованным в работе.

Для предварительной оценки «качества» амплификации на начальном этапе использовали электрофорез в 8%-ном неденатурирующем полиакриламидном геле (рисунок 12-13).

МВ 1 9 10 11 12 13 14 15 16 17 МВ

Рисунок 12 – Электрофоретический анализ аллельного полиморфизма микросателлитного локуса CH02с06, где МВ – маркер молекулярного веса ДНК; 1-17 - электрофоретические позиции продуктов ПЦР различных сортов яблони: 1 – Прима, 2 – Зефир, 3 – Екатеринодарское, 4 – Юбилей Москвы, 5 – Ноктюрн, 6 – Фея, 7 – Талида, 8 – Любава, 9 – Родничок, 10 – Тайна, 11 – Талисман, 12 – Дин Арт, 13 – Кубань, 14 – Зимнее утро, 15 – Союз, 16 – Маяк станичный, 17 – Афродита МВ Рисунок 13 – Электрофоретический анализ аллельного полиморфизма микросателлитного локуса CH01F03b, где МВ – маркер молекулярного веса ДНК; 1-7 - электрофоретические позиции продуктов ПЦР различных сортов яблони; 8 – сорт Прима В ходе апробации SSR-маркеров выявили, что для некоторых маркеров при указанных выше параметрах ПЦР, наблюдался более высокий уровень синтеза целевых фрагментов по отношению к другим маркерам.

Примером могут служить SSR-маркеры CH02с06 и CH01F03b – рисунки 12 и 13 соответственно. Очевиден более высокий уровень синтеза целевых продуктов по маркеру CH02с06 в сравнении с маркером CH01F03b, который характеризуется оптимальным уровнем синтеза целевых фрагментов. Однако, данное обстоятельство в дальнейшем не создавало затруднений при интерпретации результатов фрагментного анализа на автоматическом генетическом анализаторе ABI Prism 3130 как по указанным, так и по остальным SSR-маркерам. Следует отметить, что сорта-триплоиды Родничок, Союз, Зефир использовали на этапе апробации маркеров. В выборку сортов для SSR-генотипирования, в дальнейшем были включены сорта только с диплоидным геномом.

Микросателлитные ДНК-маркеры были сгруппированы в мультиплексные наборы (3-4 маркера в наборе) для одновременного анализа по нескольким локусам. При этом диапазон размеров амплифицируемых фрагментов не перекрывался, что необходимо для их SSR-маркеров эффективной идентификации. При этом для каждого из маркеров применяли разные флуоресцентные красители (FAM, TAMRA, R6G, ROX).

В результате выполнения фрагментного анализа на автоматическом генетическом анализаторе/секвенаторе ABI Prism 3130 были получены четкие, воспроизводимые результаты. Следует отметить, что такой тип анализа полиморфизма микросателлитных локусов позволяет получить данные об их размере с точностью до одного нуклеотида. Полученная информация является наиболее точной для составления ДНК-паспортов генотипов (сортов, клонов, селекционных форм).

На рисунке 14 в качестве примера проиллюстрированы результаты электрофоретического анализа с использованием метода капиллярного электрофореза на автоматическом генетическом анализаторе/секвенаторе ABI 3130 (результаты представлены в рабочем окне программы Prism GeneMapper 4.0).

–  –  –

Рисунок 14 – Фрагментный электрофоретический анализ ДНК сорта яблони Красный Янтарь по мультиплексному набору, включающему SSRмаркеры CH01H10, CH01h01, CH01f03b и CH02c06.

Согласно рисунку 14, в рабочем окне программы GeneMapper 4.0 показаны результаты электрофоретического анализа для четырех микросателлитных маркеров: CH01H10, CH01h01, CH01f03b и CH02c06. Два пика представлены для маркеров, по локусам которых выявлено два продукта – следовательно, локусы гетерозиготны. В данном случае это маркеры CH01h01, CH01f03b и CH02c06. По локусу CH01h10 идентифицирован один пик на электрофореграмме, что говорит о его гомозиготности.

На рисунках 15-16 представлены результаты электрофоретического анализа ДНК четырех сортов яблони отечественной селекции: Золотая корона, Имрус, Старт и Болотовское по мультиплексному набору, включающему SSRмаркеры CH01H10, CH01h01, CH01f03b и CH02c06, на автоматическом генетическом анализаторе/секвенаторе ABI Prism 3130 в двух рабочих окнах программы GeneMapper.

–  –  –

Рисунок 15 – Фрагментный электрофоретический анализ ДНК сортов яблони Золотая корона и Имрус по мультиплексному набору, включающему SSR-маркеры CH01H10, CH01h01, CH01f03b и CH02c06.

Как видно из рисунка 15, два пика характерны для всех четырех маркеров, т.е. данные локусы гетерозиготы, не смотря на то, что на одной из фореграмм (сорт яблони Имрус) наблюдается незначительное перекрывание пиков по маркерам CH01H10 и CH01h01.

–  –  –

Рисунок 16 – Фрагментный электрофоретический анализ ДНК сортов яблони Старт и Болотовское по мультиплексному набору, включающему SSRмаркеры CH01H10, CH01h01, CH01f03b и CH02c06.

На рисунке 16 показано, что для обоих сортов два продукта выявлено только по локусу CH02c06 – следовательно, локусы гетерозиготны. У сорта Старт на электрофореграмме идентифицирован один пик по локусу CH01h01, а у сорта Болотовское – по локусам CH01H10, CH01h01 и CH01f03b, что свидетельствует об их гомозиготности.

Из использованных в работе 12 маркеров наиболее высокий уровень полиморфизма по результатам анализа выборки из 31 сорта яблони показал маркер CH02c11 – 10 аллелей (таблица 10).

–  –  –

Согласно таблице маркеры проявили различный уровень 10, полиморфизма: от пяти до десяти аллелей на один микросателлитный локус.

К группе маркеров, проявивших наиболее низкий уровень полиморфизма, принадлежат: CH01f03b и CH01h01. По данным анализа 31 сортa яблони отечественной селекции, число аллелей на один локус было равным 5 и 6 соответственно.

К группе маркеров со средним уровнем полиморфизма относятся:

CH01h10, CH05f06, CH01f02, CH02c09, CH03d07.

Микросателлитные маркеры: CH02c06, CH02d08, CH04e05 и Hi02c07 показали высокий уровень полиморфизма – десять аллелей на локус и вполне наглядно отображают общую картину аллельного разнообразия в их группе.

Суммарно, по 12 изученным локусам было выявлено 93 аллеля.

Величина ожидаемой гетерозиготности варьировала в диапазоне от 0,602 (CH01h10) до 0,827 (CH02c06).

Фактическая (наблюдаемая) гетерозиготность была определена в пределах от 0, 548 (CH01h10) до 0,897 (CH02c06, Hi02c07). При этом для локусов CH02c06, CH02d08, CH04e05, CH05f06, CH01f02, CH02c11, Hi02c07 и CH02c09 фактическая гетерозиготность превышает ожидаемую, также указывая на высокий уровень генетического полиморфизма данных локусов внутри изученной группы сортов.

По результатам проведенного фрагментного анализа все сорта яблони обладали уникальным аллельным набором, позволяющим идентифицировать их среди сортов изученной выборки.

Данные об аллельных комбинациях SSR-маркеров у изученных сортов яблони представлены в таблице 11.

Таблица 11 – ДНК-паспорта изученных сортов яблони, составленные по данным фрагментного анализа SSR-маркеров Сорта яблони Микросателлитные локусы отечественной CH01f03b CH01h01 CH01h10 CH02c06 CH02d08 CH04e05 CH05f06 CH01f02 CH02c11 Hi02c07 CH02c09 CH03d07 селекции

1. Золотая 141:174 122:124 94:112 238:242 227:229 178 181:189 173:183 223:237 108:114 225:259 190:208 корона

2. КВ Зарево 141:162 122 94:100 238:256 229:233 178:213 181:189 183:208 223:231 108:114 259 208:228

3. Апорт АСС 148:182 120:124 100 254:256 229:258 178:230 185:189 185:210 233:241 104:114 245:259 190:204

4. Имрус 141:182 120:137 100:120 246:254 233:250 201:230 177:185 173:183 219:233 112:150 241:251 188:208

–  –  –

17. Талида 162:182 120:124 94:100 238 233:258 213:221 181:185 185:210 237:241 108:116 235:259 208:228

18. Кармен 162 122:124 100 238:242 229:258 213:230 181:189 183:185 233:237 114:116 235:245 208

19. Золотое 141:174 120:124 104:112 242:254 215:227 178:213 179:181 173:177 233:237 108:112 235:245 190 летнее

20. Талисман 162:174 122 100 204:254 229:258 178:205 181:189 183 223:233 114:116 241:245 190:228

–  –  –

Результаты исследований показали, что гетерозиготность, характеризующаяся одновременным присутствием двух амплифицированных фрагментов разного размера, значительно варьировала. В среднем гетерозиготность в данной выборке сортов яблони по исследованным локусам равна 24 (таблица 11). У сортов Персиковое, Нимфа по локусам CH02c06, CH03d07 и Hi02c07; Фортуна, Зимнее утро, Зори Кубани, Свежесть по локусам CH02do8, CH04e05, Hi02c07 и CH03d07 по некоторым микросателлитным маркером не были обнаружены амплифицированные фрагменты, что соответствует нулевому значению в таблице 11.

Количество гомо- и гетерозигот в изученных сортах яблони по каждому микросателлитному маркеру представлено на рисунке 17.

Рисунок 17 – Соотношение количества гомо- и гетерозигот по микросателлитным локусам в изученных образцах яблони Согласно рисунку 17, максимальное количество гетерозигот было выявлено по следующим SSR-локусам: CH02c06 (26 генотипов), CH04e05 (26 генотипов), CH05f06 (27 генотипов) и CH01f02 (26 генотипов). Меньше всего гетерозигот обнаружили по локусам CH01h10 (17 генотипов) и CH03d07 (19 генотипов). Количество гомозигот также оказалось различным: от 3-4 (по микросателлитным локусам CH01h10, CH04e05, CH05f06, Hi02c07 соответственно) до 14 (CH01h10 генотипов).

Частота встречаемости выявленных у исследованных образцов яблони аллелей по каждому микросателлитному маркеру в абсолютных величинах, а также их процентное соотношение показаны на приведенных ниже гистограммах (рисунок 18 – 25), полученных с помощью программы GenAlEx 6.3.

–  –  –

Рисунок 18 – Частота аллелей микросателлитных маркеров CH01f03b, CH01h01, CH01h10, выявленная при изучении отечественных сортов яблони Приведённая на рисунке 18 гистограмма показывает, что из трех представленных маркеров самым полиморфным являлся CH01h10, у которого было обнаружено 7 аллелей. Маркер CH01h01 выявил 6 аллелей. По маркеру CH01f03b все изученные сорта яблони имели всего лишь 5 аллелей. Интересно отметить, что по данному маркеру наибольшее число амплифицированных фрагментов имело молекулярный вес 100 п. н. – 60 % (рисунок 19).

–  –  –

На рисунке 19 наглядно показано соотношение каждого выявленного аллеля по трем микросателлитным маркерам в изученной выборке сортов яблони. Наибольшее число амплифицированных фрагментов имело молекулярный вес от 104 (13%) и 120 (29%) п. н. до 162 (31%) и 174 п. н. (34 %). Реже остальных встречались аллели с молекулярным весом 148 п. н. (3 %), 126 п. н. (2 %) и 118 п. н. (1 %) по маркерам CH01f03b, CH01h01, CH01h10 соответственно.

Рисунок 20 отображает частоту аллелей микросателлитных маркеров CH02с06, CH02d08 и CH04e05, полученную при изучении 31 сорта яблони.

–  –  –

Рисунок 20 – Частота аллелей микросателлитных маркеров CH02с06, CH02d08, CH04e05, выявленная при изучении отечественных сортов яблони Приведенная на рисунке 20 гистограмма иллюстрирует, что маркеры CH02с06, CH02d08, CH04e05 проявили одинаковый уровень полиморфизма – 9 выявленных аллелей на локус, причем наиболее распространенными оказались аллели с молекулярным весом от 178 до 258 п. н. (рисунок 21).

Следует отметить, что по данным маркером встречались нуль аллели: по маркеру CH02с06 у сортов Персиковое и Нимфа, по маркеру CH02d08 – у Фортуны, по маркеру CH04e05 – у сорта яблони Зимнее утро.

–  –  –

Как видно из рисунка 21, по маркерам CH02с06, CH02d08 и CH04e05 наибольшее число амплифицированных фрагментов имело молекулярный вес 238 п. н. (26 %), 258 п. н. (35 %) и 178 п. н. (33 %) соответственно. Меньше всего выявленно аллелей с молекулярным весом 246 п. н. (2 %) – по маркеру CH02с06; 219 п. н., 221 п. н., 250 п. н., 254 п. н. (по 2 %) – маркер CH02d08, а также 201 п. н. и 221 п. н. (CH04e05) – по 2 %.

Частота аллелей микросателлитных маркеров CH05f06, CH01f02, CH02c11 в абсолютных величинах показана на рисунке 22.

–  –  –

Рисунок 22 – Частота аллелей микросателлитных маркеров CH05f06, CH01f02, CH02c11, выявленная при изучении отечественных сортов яблони Согласно рисунку 22, максимальный уровень полиморфизма характерен для маркера CH02c11 – 10 аллелей с молекулярным весом в основном от 231 до 237 п. н. (73 %). У маркеров CH05f06 и CH01f02 было обнаружено 7 и 8 аллелей соответственно, а также встречались амплифицированные фрагменты с одинаковым молекулярным весом – 185 п. н. (рисунок 23).

–  –  –

Из рисунка 23 следует, что реже остальных встречались аллели с молекулярным весом 175, 177, 191, 208, 219 и 227 п. н., в то время как наибольшее число амплифицированных фрагментов имело молекулярный вес 189 п. н. (39 %), 183 п. н. (32 %) и 233 п. н. (44 %) по маркерам CH05f06, CH01f02 и CH02c11соответственно.

Уровень полиморфизма микросателлитных маркеров Hi02c07, CH02c09, CH03d07, выявленный при изучении отечественных сортов яблони, отображен на рисунке 24.

–  –  –

Рисунок 24 – Частота аллелей микросателлитных маркеров Hi02c07, CH02c09, CH03d07, выявленная при изучении отечественных сортов яблони.

Приведённая на рисунке 24 гистограмма иллюстрирует, что маркеры CH02c09 и CH03d07 показали средний уровень аллельного разнообразия (семь аллелей), тогда как маркер Hi02c07 обнаружил достаточно высокую степень полиморфизма – девять аллелей на локус. Причем, у маркера Hi02c07 амплифицированные фрагменты имели меньший молекулярный вес – от 104 до 166 п. н. Аллели с большим молекулярным весом от 235 до 259 п. н. были выявлены у маркера CH02c09 (рисунок 25).

–  –  –

Как видно из рисунка 25, размер амплифицированных фрагментов варьировал от 104 до 259 п. н. По маркерам Hi02c07, CH02c09 и CH03d07 наибольшее число аллелей имело молекулярный вес 116 п. н. (34 %), 235 п. н.

(31 %) и 208 п. н. (37 %), а наименьшее – 148-166 п. н. (6%), 247 п. н. (2 %) и 192 п. н. (4 %) соответственно.

На основании комплекса данных о частоте встречаемости аллелей и о размере амплифицированных последовательностей для каждого аллеля, а также уровня гетерозиготности была проведена оценка степени генетического сходства изученных сортов яблони. При этом для построения матрицы генетических дистанций использовали коэффициент (индекс) подобия по M. Nei и W. Li [Nei M. et al., 1979].

Для кластеризации образцов в соответствии со степенью их генетического сходства использовали метод попарного невзвешенного кластирования с арифметическим усреднением и методом (UPGMA) ближайших соседей (NJ), с использованием FreeTree Application 0.9.1.50 (ZDAT v.o.s.). Графическое построение дендрограммы проведено в программе TreeView (Win32) 1.6.6 (рисунок 26).

Рисунок 26 – Дендрограмма генетического сходства изученных сортов яблони, построенная по методу UPGMA Результаты кластеризации в целом отражают генетическую разнородность и происхождение сортов из изученной выборки. Это выражается в одновременном присутствии как явно выделяющихся кластеров и наличии кластеров, включающих всего два генотипа или выделение отдельных генотипов в отдельную ветвь кластера (сорт Свежесть), так и кластеров второго порядка со сложной структурой, которые состоят из последовательно включаемых в кластер отдельных генотипов. В такой кластер входят сорта Персиковое, Маяк станичный, Ноктюрн, Любава, Василиса, Кубань спур, Кармен, Болотовское, Юнона. Данные сорта входят в один кластер с сортами Талида, КВ Зарево, Золотая корона. При этом объединение их идет на таких же дистанциях генетического сходства, как и разделение ряда некоторых кластеров сортов – около 0,1. Это соответствует информации о происхождении данных сортов (таблица 12).

Сорт Свежесть (Антоновка краснобочка PR12T67 (Уэлси F2 M.

floribunda), расположенный на отдельной ветви кластера, как и выделенные в отдельный кластер, хотя и со значительной генетической дистанцией между ними, сорта Имрус (Антоновка обыкновенная OR18T13) и Зимнее утро (Либерти Скарлет Стаймаред) имеют происхождение от сортов, не представленных в родительских формах ни у одного из изученной выборки.

Также достоверность данных, полученных при кластеризации, подтверждается объединением в один кластер сортов Афродита, Старт, Солнышко, Юбилей Москвы и Строевское, которые имеют общую материнскую форму 814 (M. floribunda Голден Делишес). Кроме того, видно, что в один кластер были объединены сорта Талисман, Амулет, Красный янтарь, Фортуна, Рассвет, из которых все, за исключением сорта Фортуна, происходят из гибридной комбинации Редфри Папировка тетраплоидная.

В таблице 12 приведена информация о происхождении изученных сортов и распределение их по кластерам.

–  –  –

Как видно из результатов кластеризации (рисунок 26, таблица 12) затруднительным представляется определение несколько крупных кластеров, объединяющих все изученные генотипы. Очевидной причиной этого могут являться следующие факторы:

– присутствие нескольких небольших групп сортов (по 5-6), имеющих общие родительские формы (как одну из родительских форм, так и обе, в ряде случаев);

– разное генетическое происхождение родительских форм сортов из изученной выборки;

– наличие ряда сортов (КВ Зарево, Имрус, Зимнее утро, Свежесть), имеющих в качестве родительских форм уникальные сорта, не повторяющиеся в генеалогии ни у одного из остальных сортов изученной выборки;

– родительские формы некоторых изученных сортов имеют в своем происхождении сорта, являющиеся прямыми родителями других сортов из изученной выборки.

Такая сложная структура дендрита и невозможность однозначного распределения сортов яблони на несколько крупных кластеров было отмечено и ранее в ряде работ, посвященных изучению генетического разнообразия яблони [Шамшин И.Н. и др., 2013; Hokanson S.C. et al., 1998; SilfverbergDilworth E. et al., 2006]. Есть предположение, что формирование кластеров с высокой достоверностью затруднено в связи с наличием большого количества уникальных и редких аллелей среди изучаемых генотипов яблони, а также наблюдаемым высоким полиморфизмом анализируемых SSR-локусов [Шамшин И.Н. и др., 2013].

Факт того, что сорта с одной родословной в большинстве своем объединены в общие кластеры, говорит об объективной оценке и эффективности использования SSR-маркеров в этих целях. Возможность различать генетически близкие сорта, полученные в результате гибридизации одной родительской пары, также подтверждает перспективность использования микросателлитов в идентификации сортов, в том числе и с одинаковым происхождением.

В связи с вышесказанным, рекомендуем учитывать результаты кластеризации при планировании селекционной работы. Для получения наибольшей изменчивости в гибридных популяциях не следует использовать сорта, вошедшие в один кластер, в качестве родительских пар при гибридизации. Наряду с этим, данные SSR-генотипирования могут быть использованы в дальнейшем для подтверждения генеалогии сортов и гибридов при возникновении спорных вопросов, в случае если одна или обе их родительские формы входят в перечень изученных нами сортов яблони.

Результаты выполненных исследований нашли отражение в научноисследовательской деятельности Функционального научного центра «Садоводство», что подтверждено соответствующе й справкой о внедрении результатов диссертационной работы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1 Разработан модифицированный метод экстракции ДНК, позволяющий получать пробы ДНК с необходимой чистотой для проведения ПЦР на любом этапе вегетационного развития листьев, в том числе из листьев, гербаризованных на поздних этапах вегетации, что повышает универсальность применения ДНК-маркерного анализа.

2 По результатам скрининга, направленного на молекулярногенетическую идентификацию генов устойчивости Vm и Vf в селекционных формах и сортах яблони выявлено наличие гена Vf у 12 сортов и 46 элитных форм яблони селекции СКЗНИИСиВ. Ген Vm идентифицирован у сорта яблони Первинка и следующих ценных селекционных форм: 31-34-40, 31-31-128, 27-2-2776, 27-2-222, 29-7-101, 27-2-218.

3 Создан ДНК-маркер на основании данных о нуклеотидной последовательности гена который может быть использован при Vf, одновременной идентификации гена устойчивости яблони к парше Vf и других генов хозяйственно-ценных признаков яблони.

4 Выполнена молекулярно-генетическая идентификация аллелей гена самонесовместимости S2, S3, S7, S10 у 33 отечественных сортов яблони.

5 Установлена частота встречаемости изученных аллелей S-гена в отечественной генплазме яблони в соответствии с уровнем их распространения в мировом генофонде.

6 В результате анализа полиморфизма 12 микросателлитных маркеров в репрезентативной выборке из 31 сорта яблони отечественной селекции выявлено, что наибольшим уровнем полиморфизма обладает маркер CH02c11 – 10 аллелей, а минимальным – CH01f03b и CH01h01 – 5 и 6 аллелей соответственно.

7 На основании данных SSR-анализа для всех изученных генотипов яблони получены уникальные ДНК-фингерпринты, позволяющие идентифицировать их среди сортов изученной выборки.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ

1. Использовать ДНК-маркерный анализ в селекционных программах на устойчивость яблони к парше для идентификации генов Vf и Vm, ввиду ценности полученных результатов для создания устойчивых к парше сортов.

2. Учитывать данные о присутствии/отсутствии аллелей гена самонесовместимости при подборе родительских пар для получения максимального количества гибридного потомства с возможностью формирования сортовых схем садовых насаждений согласно информации об аллельных комбинациях S-гена у изученных сортов.

3. Использовать изученные в ходе исследования SSR-маркеры при дальнейшем исследовании генетического разнообразия отечественного генофонда яблони, а также при необходимости идентификации достоверности данных о родительских формах (происхождении) селекционных образцов.

ДНК-фингерпринты сортов могут быть использованы для решения спорных вопросов о сортовой принадлежности посадочного материала.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Артюх, С.Н. Сорта яблони / С.Н. Артюх, И.Л. Ефимова // Сад и виноградник. Краснодар. – 1998. – С. 103-112.

2. Артюх, С.Н. Принципиальные подходы к развитию плодоводства нового века – проблемы и задачи / С.Н. Артюх, А.Н. Фисенко, И.А. Драгавцева, Г.Н. Теренко, В.П. Попова // Проблемы и перспективы стабилизации и развития садоводства и виноградарства: Материалы междунар. науч.-практ. конф.

«Садоводство и виноградарство 21 века». Краснодар. – 1999. – С. 105-110.

3. Артюх, С.Н. Проблемы селекции садовых растений на юге России / С.Н. Артюх, А.П. Луговской, Л.И. Дутова // Формы и методы научного и организационно-экономического обеспечения отраслей в условиях рыночных отношений (садоводство и виноградарство). Краснодар. – 2001. – С. 134-140.

4. Ульяновкая, Е.В. Атлас лучших сортов плодовых и ягодных культур Краснодарского края. Яблоня / Е.В. Ульяновкая. – ГНУ СКЗНИИСиВ Россельхозакадемии. – 2008. – 104 с.

5. Барсукова, О.Н. Расовый состав Venturia inaequalis (Cke.) Wint. на Кавказе / О.Н. Барсукова // Микология и фитопатология. – 1985. – Т. 19. Вып.

6. – С.499-502.

6. Бондарь, Л.В. Расовый состав возбудителя парши яблони в Белоруссии и селекции яблони на иммунитет к парше / Л.В. Бондарь // Селекция яблони в СССР. Орел. – 1981. – С. 89-95.

7. Браун, А.Д. Яблоня. Селекция плодовых растений / А.Д. Браун. – М.:

Колос, 1981. – С. 13-61.

8. Гешеле, Э.Э. К биологии возбудителя парши яблони в условиях Сибири / Э.Э. Гешеле // Труды Омского с.-х. института им. С.М. Кирова. – 1958. – Т. 22. Вып. 2. – С. 117-122.

9. Гостимский, С.А. Использование молекулярных маркеров для анализа генома растений / С.А. Гостимский, З.Г. Кокаева, В.К. Боброва // Генетика. – 1999. – Т. 35. – С.1538-1549.

10. Гучетль, С.З. Применение RAPD-ПЦР маркеров для дифференциации физиологических рас Plasmopara halstedii (Farl.) Berl. et de Toni, поражающих подсолнечник в Краснодарском крае / С.З. Гучетль, Т.А. Чедюстникова, М.В.

Ивебор, Т.С. Антонова, Н.М. Арасланова, С.А. Рамазанова // Сельскохозяйственная биология. – 2008. – № 5. – С. 82-87.

11. Егоров, Е.А. Программа Северо-Кавказского центра по селекции плодовых, ягодных, цветочно-декоративных культур и винограда на период до 2030 года / Е.А. Егоров. – Краснодар: ГНУ СКЗНИИСиВ, 2013. – 202 с.

12. Ефимова, И.Л. Оценка самоплодности сортов яблони. Селекционногенетическое совершенствование породно-сортового состава садовых культур на Северном Кавказе / И.Л. Ефимова; под ред. Э.В. Макарова. – Краснодар, 2005. – С. 102-104.

13. Ефимова, И.Л. Устойчивость сортов яблони к грибным заболеваниям на юге России / И.Л. Ефимова, Г.В. Якуба // Плодоводство и ягодоводство России. – 2010. – Т.24. – №2. – С 403-409.

14. Ефимова, И.Л., Якуба Г.В. Поражаемость сортов яблони грибными болезнями в условиях Краснодарского края // Плодоводство и ягодоводство России. – 2012. – Т.30. – С 352-358.

15. Жданов, В.В. Генетико-иммунологические основы, результаты и перспективы селекции яблони на устойчивость к болезням и вредителям / В.В.

Жданов, Е.Н. Седов. // Юбилейный сб.– Орел: ВНИИСПК. – 1995. – С. 88-101.

16. Жданов, В.В. Селекция яблони на устойчивость к парше / В.В.

Жданов, Е.Н. Седов. – Тула: Приок. кн. изд-во, 1991 – 207 с.

17. Ищенко, Л.А. Достижения и проблемы иммунитета плодовых и ягодных культур / Л.А. Ищенко // Генетические основы селекции на иммунитет плодовых, ягодных культур и винограда. Мичуринск. – 1987. – С. 3-14.

18. Казенас, Л.Д. Болезни плодовых и ягодных культур Алма-Атинской зоны плодоводства / Л.Д. Казенас // Труды республиканской станции защиты растений. – 1953. – Т. 1. – С. 179-257.

19. Козловская, З.А. Сравнительная оценка потенциала устойчивости к парше сортов и гибридов яблони в эпифитотийный год / З.А. Козловская, С.А.

Ярмолич, Г.М. Марудо // Плодоводство. Самохваловичи. – 2005. – Т.17. – Ч.1. – С. 30-34.

20. Конарев, В.Г. Белки как генетические маркеры растений / В.Г.

Конарев. – М.: Колос, 1983. – 320 с.

21. Куликов, И.М. Инновационные направления в производстве сертифицированного посадочного материала плодовых и ягодных культур / И.М. Куликов // Плодоводство и ягодоводство России. – 2008. – Т.18. – С. 3-7.

22. Куликов, И.М. Производство плодов и ягод в мире / И.М. Куликов, О.З. Метлицкий // Плодоводство и ягодоводство в России. – 2006. – T.7. – С. 99-112.

23. Льюин, Б. Гены / Б. Льюин. – М.: Мир, 1987. – 544 с.

24. Матвеева, В.К. Парша яблони в Алма-Атинской области / В.К.

Матвеева, Л.П. Сахарова // Вестник сельскохозяйственной науки. Алма-Ата. – 1965. – №7. – С. 122-124.

25. Остерман, Л.А. Методы исследования нуклеиновых кислот / Л.А.

Остерман. – М.: Наука, 1981. – 288 с.

26. Пономаренко, В.В. Генетический потенциал видов рода Malus Mill.

устойчивости к парше / В.В. Пономаренко // Совершенствование сортимента и технологий возделывания плодовых и ягодных культур: Материалы международной научно-практич. конф. Орел. – 2010. – С. 56-78.

27. Савельев, Н.И. Генетические основы селекции яблони / Н.И. Савельев.

– Мичуринск: Изд-во ВНИИГиСПР им. Мичурирна, 1998. – 304 с.

28. Савельев, Н.И. Достижения по селекции сортов яблони с генетической устойчивостью к парше / Н.И. Савельев // Современные тенденции развития промышленного садоводства. Барнаул. – 2008. – С. 130-135.

29. Савельев, Н.И. Яблоня. Создание новых сортов и доноров ценных признаков на основе идентификации генов плодовых растений / под ред. Н.И.

Савельева. – Мичуринск: ВНИИГИСПР им. И.В. Мичурина, 2002. – 20 с.

30. Савельева, Н.Н. Экономическая эффективность иммунных к парше сортов яблони в период полного плодоношения / Н.Н. Савельева, Н.И. Савельев // Оптимизация технолого-экономических параметров структуры агроценозов и регламентов возделывания плодовых культур и винограда. Краснодар:

СКЗНИИСиВ. – 2008. – Т.1. – С.60-64.

31. Сахарова, Л.П. Биологические особенности двух рас возбудителя парши яблони на юго-востоке Казахстана / Л.П. Сахарова // Вестник сельскохозяйственной науки. – 1968. – №3. – С. 117-122.

32. Сиволап, Ю.М. Использование продуктов полимеразной цепной реакции для картирования генома ячменя (Hordeum vulgare L.) / Ю.М.

Сиволап, Р.Н. Календарь, В.П. Нецветаев // Генетика. – 1997. – Т. 33. – С. 53-60.

33. Седов, Е.Н. История, задачи, методы и результаты селекции яблони / Е.Н. Седов // Сельскохозяйственная биология. – 2007. – №1. – С. 3-15.

34. Седов, Е.Н. Помология. Яблоня / Е.Н. Седов. – Орел: ВНИИСПК, 2005. – 576 с.

35. Седов, Е.Н. Селекция семечковых культур на устойчивость к парше и мучнистой росе – приоритетное направление науки / Е.Н. Седов // Садоводство и виноградарство. – 1992. – №1. – С. 11-14

36. Седов, Е.Н. Селекция и агробиологическая оценка новых сортов яблони / Е.Н. Седов, М.А. Макаркина, З.М. Серова // Доклады РАСХН. – 2006.

– №3. – С. 74-82.

37. Седов, Е.Н. Методика отбора устойчивых к парше сортов и сеянцев яблони на искусственных инфекционных фонах / Е.Н. Седов, В.В. Жданов. – М., 1985. – 48 с.

38. Седов, Е.Н. Отбор иммунных к парше гибридов яблони на искусственном инфекционном фоне / Е.Н. Седов, В.В. Жданов // Микология и фитопатология. – 1987. – Т. 21. – Вып. 5. – С. 463-466.

39. Седов, Е.Н. Пути селекции яблони на стабильную устойчивость к парше / Е.Н. Седов, В.В. Жданов // Четвертый съезд Всесоюзного общества генетиков и селекционеров им. Н.И. Вавилова: Тезисы докл. Кишинев. – 1982. – С. 165-166.

40. Седов, Е.Н., Жданов В.В. Устойчивость яблони к парше (сорта и селекция) / Е.Н. Седов, В.В. Жданов. – Орел, 1983. – 113 с.

41. Смольякова, В.М. Элементы концепции экологизации защиты плодовых и ягодных культур от вредных организмов / В.М. Смольякова, Л.А.

Пузанова, Г.В. Якуба, Н.А. Холод // Основные итоги научных исследований.

Краснодар. – 2005. – С. 108-111.

42. Созинов, А.А. Полиморфизм белков и его значение в генетике и селекции / А.А. Созинов. – М., 1985. – 245 с.

43. Суворова, Г.Н. Филогенетическое родство некоторых сортов, видов и гибридов рода Fagopyrum Mill., установленное RAPD-анализом / Г.Н. Суворова, Х. Фунатсуки, Ф. Терами // Генетика. – 1999. – Т. 35. – С. 1659-1664.

44. Супрун, И.И. Генотипирование подвоев яблони отечественной селекции с использованием мультиплексного STR-анализа / И.И. Супрун, Я.И.

Алексеев, О.П. Малюченко, А.В. Бабаков, Я.В. Ушакова // Садоводство и виноградарство. – 2012. – №4. – С. 20-23.

Супрун, И.И. Молекулярно-генетические аспекты 45.

самонесовместимости яблони [Электронный ресурс] / И.И. Супрун, И.В.

Степанов, С.В. Токмаков // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университет. – 2012. №06 (80).

– Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2012/06/pdf/26.pdf.

46. Супрун, И.И. Изучение аллельного разнообразия генов синтеза этилена Md-ACS1 и Md-ACO1 в отечественной генплазме яблони / И.И.

Супрун, С.В. Токмаков // Вавиловский журнал генетики и селекции. – 2013. – Т. 17. – № 2. – С. 298-302.

47. Супрун, И.И. Генотипирование сортов яблони российской селекции с использованием микросателлитных маркеров / И.И. Супрун, С.В. Токмаков, О.П. Малюченко, Я.В. Ушакова, А.В. Бабаков // Известия ТСХА. – 2011. – Вып.6. – С.162-166.

48. Супрун, И.И. Идентификация аллелей S2, S3, S5, S6 гена самонесовместимости у сортов черешни из коллекции СКЗНИИСиВ / И.И.

Супрун, С.В. Токмаков, И.В. Степанов // Методологическое обеспечение селекции садовых культур и винограда на современном этапе. Краснодар.

СКЗНИИСиВ. – Т.1. – 2013. – С. 97-101.

49. Супрун, И.И. Генотипирование сортов яблони российской селекции с использованием микросателлитных маркеров / Супрун И.И., Токмаков С.В., Малюченко О.П., Ушакова Я.В., Бабаков А.В. // Известия ТСХН. – 2011. – Вып.

6. – С. 162-166.

50. Супрун, И.И. Разработка мультиплексных наборов SSR-маркеров для использования в изучении генетического разнообразия в пределах родов Malus, Prunus и Pyrus / И.И.Супрун, С.В. Токмаков, И.В. Степанов, И.М. Балапанов // Метологическое обеспечение селекции садовых культур и винограда на современном этапе. Краснодар. ГНУ СКЗНИИСиВ. – 2013. – Том 1. – 282 с.

Супрун, И.И. Изучение аллельного полиморфизма гена 51.

самонесовместимости и цитологических особенностей опыления сортов яблони [Электронный ресурс] / И.И. Супрун, Е.В. Ульяновская // Плодоводство и виноградарство Юга России. – 2012. – № 13 (01). – Режим доступа:

http://journal.kubansad.ru/pdf/12/01/02.pdf.

52. Супрун, И.И. Использование молекулярно-генетических методов установления закономерностей наследования для выявления доноров значимых признаков яблони [Электронный ресурс] / И.И Супрун, Е.В. Ульяновская, Е.Н.

Седов, Г.А. Седышева, З.М. Серова // Плодоводство и виноградарство Юга

России. – – № 13 (01). – Режим доступа:

2012.

http://journal.kubansad.ru/pdf/12/01/02.pdf.

53. Супрун, И.И. Методологические аспекты использования ДНКмаркирования в селекции яблони на устойчивость к парше / И.И. Супрун, Е.В.

Ульяновская, Я.В. Ушакова // Труды Кубанского государственного университета. – 2010. – №1(22). – С. 86-88.

54. Супрун, И.И. Использование методов ДНК-маркирования для идентификации аллелей гена самонесовместимости яблони / И.И. Супрун, Е.В.



Pages:     | 1 | 2 || 4 |

Похожие работы:

«Хохлова Светлана Викторовна ИНДИВИДУАЛИЗАЦИЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ 14.01.12-онкология ДИССЕРТАЦИЯ На соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: Доктор медицинских наук, профессор Горбунова В.А Москва 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение Глава 1. Обзор литературы 1.1. Общая характеристика рака яичников 1.1.1. Молекулярно-биологические и...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Любас Артем Александрович ПАЛЕОРЕКОНСТРУКЦИЯ СРЕДЫ ОБИТАНИЯ ПРЕСНОВОДНЫХ МОЛЛЮСКОВ В НЕОГЕН-ЧЕТВЕРТИЧНЫХ ВОДОТОКАХ С ЭКСТРЕМАЛЬНЫМИ ПРИРОДНЫМИ УСЛОВИЯМИ Специальность 25.00.25 – геоморфология и эволюционная география Диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: доктор биологических наук...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«Куяров Артём Александрович РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА 03.02.03 – микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание учёной степени кандидата...»

«Моторыкина Татьяна Николаевна ЛАПЧАТКИ (РОД POTENTILLA L., ROSACEAE) ФЛОРЫ ПРИАМУРЬЯ И ПРИМОРЬЯ 03.02.01 – Ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, старший научный сотрудник Н.С. Пробатова Хабаровск Содержание Введение... Глава 1. Природные...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов...»

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Цховребова Альбина Ирадионовна ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА РАЗВИТИЕ БЕСХВОСТЫХ АМФИБИЙ СЕВЕРНЫХ СКЛОНОВ ЦЕНТРАЛЬНОГО КАВКАЗА Специальность 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук профессор Калабеков Артур Лазаревич Владикавказ 2015 Содержание Ведение..3 Глава I. Обзор литературных данных. 1.1....»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«ПИМЕНОВА ЕКАТЕРИНА ВЛАДИМИРОВНА РАЗРАБОТКА МЕТОДА ОЦЕНКИ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ АНТИГЕНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ МЕЛИОИДОЗА IN VITRO НА МОДЕЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.